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目的：建立以反相高效液相色谱法测定烟叶提取物中茄尼醇含量及提取、纯化高纯度茄尼醇的方法。方法：色谱柱为C8，流动相为甲醇-乙腈（95：5），检测波长为210nm，流速为1．0ml／min，柱温为25℃；按提取、分离、纯化步骤得到提取物样品并测定其中茄尼醇含量。结果：茄尼醇检测浓度在1．14～114．0μg／ml范围内线性关系良好（r=0．9998，n=6），平均加样回收率为99．2％（RSD=1．5％）；不同分离纯化方法所得茄尼醇含量不同（28．7％～99．2％）。结论：含量测定方法准确性、重现性均良好，