【摘 要】
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目的构建大肠杆菌K99菌毛表达载体.方法通过逐级亚克隆的方法克隆K99菌毛形成亚单位基因(fanC),并进行序列测定和fanC亚单位的抗原决定簇模拟,以确定突变部位.结果克隆了包括
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,210095中科院上海生物工程研究中心,上海,200233;
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目的构建大肠杆菌K99菌毛表达载体.方法通过逐级亚克隆的方法克隆K99菌毛形成亚单位基因(fanC),并进行序列测定和fanC亚单位的抗原决定簇模拟,以确定突变部位.结果克隆了包括K99菌毛形成亚单位基因(fanC)和部分fanD基因在内的一段基因,该基因与国外报道相比明显偏大.序列测定表明: 在fanC尾部多出24bp,在fanC与fanD的结合部有一800bp左右的新基因.经与基因库中大肠杆菌基因作同源性比较发现,该新基因为768bp的插入序列IS1.其他基因为K99自身fanC与fanD片段之间的过渡基因.IS1的插入未改变fanD基因的阅读框架,只是使fanC片段末端增加了8个氨基酸.fanC亚单位的抗原决定簇模拟结果显示,K99 fanC片段具有一个非常突出的亲水区域,根据经验它应是抗原决定簇所在的部位.结论首次发现大肠杆菌K99基因中含有插入序列IS1.
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