【摘 要】
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目的 探讨芫花水提物对斑马鱼幼鱼的肝脏毒性及其机制.方法 用高、中、低浓度,分别是200 mg/L、150 mg/L、100 mg/L的芫花水提物处理受精4天的斑马鱼幼鱼,每组斑马鱼尾数为20,24小时后收集幼鱼样本,实验重复3次,通过对给药处理的幼鱼样本进行苏木精—伊红染色法制作病理切片观察病理状态;油红O染色观察脂肪堆积情况;对幼鱼组织样本中的RNA进行提取,用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q-RT-PCR)测定与肝脏相关基因的表达水平的变化;测定Caspa
【机 构】
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102488 北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室
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目的 探讨芫花水提物对斑马鱼幼鱼的肝脏毒性及其机制.方法 用高、中、低浓度,分别是200 mg/L、150 mg/L、100 mg/L的芫花水提物处理受精4天的斑马鱼幼鱼,每组斑马鱼尾数为20,24小时后收集幼鱼样本,实验重复3次,通过对给药处理的幼鱼样本进行苏木精—伊红染色法制作病理切片观察病理状态;油红O染色观察脂肪堆积情况;对幼鱼组织样本中的RNA进行提取,用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q-RT-PCR)测定与肝脏相关基因的表达水平的变化;测定Caspase-3活性观察细胞凋亡,评价芫花水提物给药处理的斑马鱼幼鱼肝脏毒性表现形式及对其机制进行探讨.结果 肝脏病理切片结果显示,与空白对照组相比,给药组中斑马鱼幼鱼肝脏细胞结构改变,出现空泡化,肝实质细胞减少,出现萎缩变形;油红O染色结果中给药组斑马鱼肝脏处有色素沉着,表明有脂肪堆积;通过q-RT-PCR测定肝脏相关基因的表达水平,结果显示,相对于空白对照组,给药组的激活转录因子4(activating transcription factor 4,atf4a)、90KDA热休克蛋白B1(recombinant human heat shock protein 90kDa beta(GRP94)member 1,hsp90b1)、EIF2S1蛋白磷酸化抗体对(protein phosphorylation antibody pair,eif2s1)、脂肪酸合成酶基因(fatty acid synthase,fasn)、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,rbp4)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)的mRNA表达水平显著上调(P<0.01);丙酮酸脱氢酶E1α亚单位基因(pyruvate de-hydrogenase complex E1a subunit,pdha1a)、肝红细胞丙酮酸激酶(recombinant human pyruvate kinase,liver and RBC,pklr)、解偶联蛋白2(uncouplingprotein 2,ucp2)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase 1,sod1)、自噬基因(beclin)、自噬相关蛋白3(autophagy related 3 homolog,ATG3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达下调(P<0.01);Caspase-3测定结果显示其活性增强(P<0.05).结论 芫花水提物诱导斑马鱼幼鱼的肝脏细胞结构改变,出现空泡化、萎缩变形等病理状态;并在肝脏处有脂肪堆积现象,其原因可能与肝脏代谢功能异常有关;结合基因测定结果,推测芫花的毒性机制可能与线粒体功能失常,脂质代谢障碍相关,进而诱导内质网应激,氧化应激及炎症反应最终导致细胞凋亡.
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慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome,CFS)是一种原因不明的以反复发作或不可缓解的慢性疲劳为主要症状,伴有一系列兼症的临床常见病.文章以王永炎院士“虚气流滞”学说对CFS中医病机及治疗进行探析,认为CFS患者元气亏虚,虚气不行,气血相失,气血津液运行失常,导致气滞、血瘀、痰湿等病理产物蕴积体内,损伤脏腑经脉所致.临床治疗上采取补气养血、滋阴温阳补其虚,理气活血、化痰祛湿以通其滞,并初步进行“补虚”“通滞”的机制探讨,为进一步的临床治疗和科学研究提供思路.
膜性肾病基本病机属本虚标实,以肺脾肾亏虚为本,水湿、血瘀为标.虫类药为血肉有情之品因其走窜通达之性功效独特.临床治疗中以“辨体质、抓病机、定病位、审时机”为诊疗思路,联合具有祛风除湿、活血化瘀、温补阳气功效虫类药,剂量合理,选药得当、配伍精妙,治疗效果显著.
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痰饮的概念从《金匮要略》提出后,经过历代医家的发挥,其内涵已经有所变革和发展,宋代以前偏重于饮,宋代以后开始痰、饮分治;其治则由“病痰饮者,当以温药和之”向“疗痰之法,理气为上,和胃次之”及“善治痰者,不治痰而治气,气顺则痰消”过渡;相应的代表方也从苓桂术甘汤向二陈汤发展.本文通过对痰饮的历史沿革进行梳理,对苓桂术甘汤及二陈汤的组方应用进行阐释,进一步加深对痰饮病源流的认识,以期灵活的掌握用药规律,更好的指导临床.
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《伤寒杂病论》之所以被誉为医门之圭皋,与仲景辨证之精准,立法之严谨,用药之精当密切相关.本文通过对各家学说的疏理以及仲景原文中关于三急下的论述,结合临证中少阴病腑气不通的证治特点,提出“少阴三急下”中所提到的“少阴”并非是真正的少阴病,而是阳明病之阳明腑实证“热深厥亦深”表现为手足厥冷的真热假寒证与少阴病四逆证的鉴别诊断.进而深层次的体现了仲景临证时以病为纲,以证为靶,病证结合的治疗学思想.
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