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目的
观察乏氧和缺血是否通过诱导自噬拮抗肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82（KAI1）的生长抑制作用。
方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2，通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1使细胞表达KAI1蛋白，通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境，根据培养条件不同，将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组：对照组（正常培养）、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。Western blot检测细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的改变。3-MA预处理阻断自噬，共聚焦显微镜观察自噬标志颗粒GFP-LC3颗粒。采用Annexin V-FITC/ PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。
结果MiaPaCa2细胞不表达KAI1蛋白，感染Ad5-KAI1后表达KAI1蛋白，乏氧和去血清均显著促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加和GFP-LC3融合质粒的增加，且均可被3-MA有效阻断。3-MA预处理后感染Ad5-KAI1，4组细胞（含氧含血清正常培养的细胞、单纯去血清培养的细胞、单纯乏氧培养的细胞、联合去血清和乏氧培养的细胞）的Annexin V表达均显著增长，分别由70%、34%、28%和19%增至86%～ 90%。提示3-MA预处理可以阻断去血清和乏氧对KAI1引起的Annexin V表达增加的抑制作用。提示乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡。
结论乏氧和缺血清培养细胞通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡，促进细胞生存。