【摘 要】
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为了建立一种快速检测鸡肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)的新型可视化交叉等温扩增(CPA)检测技术,本研究针对鸡肠炎沙门氏菌sefA保守基因设计CPA的特异性引物,通过对反应条件和主要组分优化后建立检测S.enteritidis的快速检测方法.利用该CPA法对8株鸡肠炎沙门氏菌和7株其他参考菌株进行检测,同时利用环介导等温扩增(LAMP)法进行检测,对比分析本研究建立CPA法的特异性,结果显示,建立并优化基于sefA保守基因的可视化CPA法,与LAMP方法相比,该方法能够检测所有S.enterit
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030
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为了建立一种快速检测鸡肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)的新型可视化交叉等温扩增(CPA)检测技术,本研究针对鸡肠炎沙门氏菌sefA保守基因设计CPA的特异性引物,通过对反应条件和主要组分优化后建立检测S.enteritidis的快速检测方法.利用该CPA法对8株鸡肠炎沙门氏菌和7株其他参考菌株进行检测,同时利用环介导等温扩增(LAMP)法进行检测,对比分析本研究建立CPA法的特异性,结果显示,建立并优化基于sefA保守基因的可视化CPA法,与LAMP方法相比,该方法能够检测所有S.enteritidis菌株而对其他致病菌株无扩增;挑取鸡肠炎沙门氏菌ATCC 13076单菌落接种到营养肉汤培养基中过夜培养后,经菌落计数后并对菌液10倍倍比稀释(1×106 cfu/mL～1×10-1cfu/mL)进行敏感性试验,结果显示,CPA法的检测下限为1×101 cfu/mL,为PCR法敏感性的100倍.进一步利用传统培养法对138份肉鸡腹泻粪便样品进行检测,同时利用以上CPA法、LAMP和PCR方法进行检测,评价以上各方法的检测性能,结果显示,CPA法的检出率(16.67％)与传统细菌培养法相当,但高于LAMP法(15.21％)和PCR法(13.77％),表明建立的可视化CPA法可实现快速、准确地检测鸡肠炎沙门氏菌,且不需要复杂仪器设备.本研究建立的检测鸡肠炎沙门氏菌可视化CPA法在基层兽医检验领域具有广阔的应用前景.
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