运用逆转录解旋酶等温扩增（RT-tHDA）和侧流层析技术，建立新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测新方法。
方法收集2020年1至4月东部战区总医院基础医学实验室共143份2019-nCoV PCR阴性核酸标本和20份PCR阳性核酸标本。针对2019-nCoV N基因和E基因保守区序列各设计5对引物，扩增产物进行凝胶电泳分析，筛选出RT-tHDA最佳引物。分别扩增高浓度（5×105 拷贝/ml）、低浓度（5×102拷贝/ml）模拟标本，利用侧流层析试纸条（LFD）检测RT-tHDA扩增产物，使结果可视化。优化显色和扩增时间，建立tHDA-LFD最佳反应体系。该方法检测各低、中、高3种浓度的模拟标本15次，以阳性符合率来评估方法学精密度。制备模拟标本评价方法学检测限。分别检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒229E，评价tHDA-LFD法的交叉反应性。采用tHDA-LFD法检测本实验室收集保存的163份标本，进行临床诊断效能评价。
结果采用一步法RT-tHDA结合LFD，建立扩增时间为60 min的2019-nCoV核酸检测方法。该方法检测3种浓度的模拟标本，阳性符合率为100%，精密度和重复性较好，且与其他6种呼吸道病原体均未出现交叉反应。该方法检测N基因、E基因的最低检测限均为5×102 拷贝/ml。诊断效能评价结果显示，该法敏感度为95.00%（19/20），特异度为100.00%（143/143），阳性预测值为100.00%（19/19），阴性预测值为99.31%（143/144）。和金标准qPCR法相比，两种方法的Kappa值为0.971（P<0.000 1），一致性较好。
结论本研究成功建立了基于tHDA-LFD法的2019-nCoV可视化检测方法。