【摘 要】
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为探讨Smad1/5基因在贝类生长发育中的调控作用,利用RACE技术克隆获得文蛤Smad1/5(MmSmad1/5)基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、不同组织和不同发育时期时空表达特征进行
【基金项目】
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国家自然科学基金(31372527);国家现代贝类产业技术体系项目(CARS-48);国家水产种质资源平台项目(2018DKA30470);江苏省苏北科技专项(BN2015059)资助~~
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为探讨Smad1/5基因在贝类生长发育中的调控作用,利用RACE技术克隆获得文蛤Smad1/5(MmSmad1/5)基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、不同组织和不同发育时期时空表达特征进行分析,并利用直接测序法分析了外显子区域SNP位点与生长性状的相关性。结果表明:Mm-Smad1/5的c DNA全长序列为1832 bp,开放阅读框1380 bp,编码459个氨基酸;氨基酸多序列比对显示,Mm-Smad1/5蛋白与太平洋牡蛎Smad5、大西洋舟螺Smad1的一致性分别为83.7%和80.2%,与人、鸡、非洲爪蟾等脊椎动物Smad1、Smad5氨基酸序列的一致性达到70.5%以上,说明该基因具有较高的保守性;结构域预测发现,Mm-Smad1/5含有Smads蛋白家族特有MH1、MH2两个高度保守结构域。荧光定量PCR(q RT-PCR)结果表明,Mm-Smad1/5基因在成体6个组织均有表达,尤其在斧足、外套膜中表达量显著高于其他组织(P<0.05);Mm-Smad1/5基因在各发育时期广泛表达,从原肠胚期开始大量表达,一直持续到壳顶幼虫期,而从眼点幼虫大量下降,稚贝时期又有所上升。Mm-Smad1/5基因外显子区域SNP位点相关分析表明,共发现了9个SNP位点,其中936 G>T位点与文蛤的生长性状显著相关(P<0.05)。Mm-Smad1/5基因在文蛤生长发育中发挥重要调控作用,可作为高产良种选育的候选基因,而生长关联SNP位点分析将为文蛤分子标记辅助育种研究奠定重要基础。
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