【摘 要】
：
研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法,采用正交试验设计法对影响SRAP-PCR反应的引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量、Mg2+和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进
【机 构】
：
三峡大学化学与生命科学学院生物技术研究中心/天然产物研究与利用湖北省重点实验室,湖北,宜昌,443002
论文部分内容阅读
研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法,采用正交试验设计法对影响SRAP-PCR反应的引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量、Mg2+和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化.同时对DNA模板浓度进行了筛选.结果表明,Mg2+、dNTPs、Taq酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响.建立了巴东木莲20μL SRAP-PCR的反应体系为lxbuffer、Mg2+浓度为2.O mmol.L-1、dNTPs浓度为O.25 mmol·L-1、引物浓度为0.45μmol·L-1、Taq酶为0.5 U和模板DNA 40ng.适宜的扩增程序为94℃预变性1 min,94℃变性1 min,33℃复性1 min,72℃延伸1 min,10个循环;94℃变性1 min.55℃复性l min,72℃延伸1 rain,30个循环;最后72℃延伸5min.试验表明,该体系重复性好、稳定性强.
其他文献
利用2006～2007年间武汉市武湖牧场971头荷斯坦母牛23个体型线性性状的鉴定记录,配合单性状和多性状动物模型,利用MTDFREML软件,采用REML方法,估计了各体型性状的相关参数.23个
通过水培方法研究了重金属Cu2+、Zn2+对糯玉米种子萌发及幼苗早期生长的影响.结果表明,重金属胁迫下,低浓度(≤50mg·L-1Cu2+、Zn2+对种子萌发无显著影响,高浓度抑制种子萌发
介绍了1%苦皮藤素超低容量油剂的配方制备方法,确立了较佳的配方组成及质量控制指标.研究了该制剂的杀蝗虫活性,表明该农药制剂具有成本低、质量稳定、使用安全、市场前景看
生物体受到热胁迫后,会产生一系列的热胁迫响应,热激转录因子(Heat stress transcription factor,Hsfs)是热胁迫响应的主要调节因子.植物Hsfs与动物和微生物的Hsfs相比,具有
试验通过转绵羊金属硫蛋白启动子-猪生长激素(oMT-pGH)基因和转绵羊金属硫蛋白启动子-猪生长激素-微卫星DNA(oMT-pGH-microsatellite DNA)基因猪的连续传代.分析了后代中转基
以猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)标准强毒石门株为模板,RT-PCR扩增CSFV E2基因N端的主要抗原区(△E2).PCR产物定向克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组表
运用火焰原子吸收分光光度法和石墨炉法对两面针样品中的金属元素Fe、Cu、Zn、Mg、Ca、Pb、Sn 的含量进行了测定.结果表明,试验方法简单,精密度和灵敏度高,回收率为98.26%-10
采用土壤养分状况系统研究法分析了湖北省花生主产区的土壤主要养分含量,并在田间试验下进行了验证.结果表明,湖北省花生主产区土壤普遍缺氯,部分地区缺磷,大面积缺钾和硼.平
湖北省甘薯科研生产日益受到重视,种植区域正由西部山区开始向丘陵岗地拓展,加工企业正向规模化、集约化发展.目前应以企业为中心,以优质专用甘薯品种为基础,建立规模化的甘
为了科学制定鹅的禽流感疫苗免疫程序,进行了5方面的试验.结果表明,雏鹅首免后3周可测定出AI-HI抗体,4周达到高峰,AI-HI抗体为4.8log2,6周开始下降.产蛋鹅免疫后4周抗体达到