【摘 要】
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目的 构建血清/糖皮质激素调节激酶1（SGK1）基因敲除的人弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株，分析SGK1基因敲除对SU-DHL-4细胞增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）SU-DHL-4细胞株，作为SGK1-Ko组，另外设置阴性对照组（sgRNA-NC组）,经嘌呤霉素筛选出稳定敲除株，经测序
【机 构】
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广西医科大学附属肿瘤医院淋巴血液及儿童肿瘤科
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目的 构建血清/糖皮质激素调节激酶1（SGK1）基因敲除的人弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株，分析SGK1基因敲除对SU-DHL-4细胞增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）SU-DHL-4细胞株，作为SGK1-Ko组，另外设置阴性对照组（sgRNA-NC组）,经嘌呤霉素筛选出稳定敲除株，经测序证实，通过RT-PCR及蛋白质印迹法检测基因敲除株的SGK1表达；细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况，Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。2组独立数据在不同时间点的比较采用2因素方差分析，2组间差异比较采用t检验。结果 在荧光显微镜下可观察到SGK1-Ko组GFP稳定表达。SGK1-Ko组RT-PCR产物电泳显示无条带。蛋白质印迹法结果显示，SGK1-Ko组细胞无SGK1蛋白表达。CCK8法结果显示，在细胞培养24、48、72和96 h后，sgRNA-NC组细胞光密度D值分别为0.256±0.002、0.566±0.005、1.246±0.016和1.348±0.021,SGK1-Ko组分别为0.180±0.003、0.321±0.004、0.847±0.056和1.043±0.010,SGK1-Ko组细胞增殖能力低于sgRNA-NC组，F时间=4 404.099,P时间＜0.001;F组别=439.184,P组别＜0.001;F组别×时间=316.874,P组别×时间=0.003。流式细胞术检测结果显示，SGK1-Ko组凋亡率为（10.057±0.350）%,高于sgRNA-NC组的（4.310±0.235）%,t=19.272,P＜0.001。SGK1-Ko组处于G0/G1期的细胞比例为（87.020±4.405）%,高于sgRNA-NC组的（70.810±2.707）%,t=4.434,P=0.011;SGK1-Ko组处于S期的细胞比例为（9.343±2.083）%,低于sgRNA-NC组的（27.127±1.343）%,t=10.146,P=0.001。Transwell迁移实验结果显示，SGK1-Ko组细胞24、48 h迁移水平分别为0.117±0.037和0.138±0.046,sgRNA-NC组为0.121±0.033和0.127±0.045,t值分别为0.107、0.238,P值分别为0.920、0.823。结论 成功构建稳定敲除SGK1基因的SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株，SGK1敲除可抑制SU-DHL-4细胞增殖、诱导凋亡和阻滞细胞周期，对细胞迁移无影响。
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