多用途基因捕获C3H/10T1/2细胞阳性克隆库的构建及鉴定

来源 :第四军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangdd1984
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目的:以10T1/2细胞为间充质干细胞模型,构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库.方法:Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后,与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞,LacZ染色证明转染成功后收集病毒上清感染10T1/2细胞.经潮霉素筛选获得阳性克隆,为排除假阳性克隆用LacZ部分片段PCR进行鉴定.结果:ROSAFARY脂质体转染phoenix细胞后48h,GFP指示的转染效率约为20%~30%,LacZ染色有大约10%的阳性率.15
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