血脂异常ApoE基因缺失小鼠视网膜色素上皮细胞胞浆内黑色素和脂褐素的改变

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目的探讨血脂异常载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因缺失(ApoE-/-)小鼠视网膜色素上皮(retinal pigment ep-ithelium,RPE)细胞胞浆内黑色素和脂褐素的改变。方法将24只2个月龄ApoE-/-小鼠随机分为高脂组和普食组,每组12只,另用12只2个月龄C57BL小鼠作为普食组,喂养4个月后检测其血浆总胆固醇(total plasma cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、甘油三酯(plasma triglyceride,TG)含量,Masson三色、银氨液浸染法和醛品红法染色后光镜下观察视网膜光感受器细胞(photoreceptor cell,PRC)、RPE细胞、Bruch膜形态结构,半定量检测视网膜PRC数、RPE细胞数、Bruch膜厚度、RPE细胞胞浆内黑色素和脂褐素含量,采用逐步引入-剔除法多元线性回归分析RPE细胞数与TC、LDL、TG含量的相关性及RPE细胞胞浆内黑色素、脂褐素含量与PRC数、RPE细胞数、Bruch膜厚度的相关性。结果ApoE-/-高脂组、ApoE-/-普食组、C57BL普食组小鼠血浆TC的含量分别为(13.262±0.458)mmol·L-1、(9.722±0.412)mmol·L-1、(5.150±0.308)mmol·L-1,LDL的含量分别为(2.030±0.186)mmol·L-1、(1.047±0.158)mmol·L-1、(0.427±0.080)mmol·L-1,TG的含量分别为(1.233±0.199)mmol·L-1、(0.777±0.161)mmol·L-1、(0.530±0.168)mmol·L-1,PRC细胞核面积分别为(20135.000±1473.272)μm2、(23208.000±716.913)μm2、(26952.000±2449.104)μm2,RPE细胞数分别为8.900±1.148、10.200±0.835、13.800±1.016,Bruch膜厚度分别为(0.982±0.071)μm、(0.870±0.042)μm、(0.594±0.031)μm。ApoE-/-高脂组和普食组小鼠TC、LDL、TG含量较C57BL普食明显增高(P<0.05或0.001)。光镜下观察发现:ApoE-/-高脂组和ApoE-/-普食组小鼠视网膜PRC、RPE细胞排列紊乱、萎缩,RPE细胞内黑色素分布稀疏、面积小,脂褐素分布密集、范围广,Bruch膜粗细不等,胶原分叉,部分小鼠视网膜下可见玻璃膜疣形成;半定量结果显示,ApoE-/-高脂组和ApoE-/-普食组小鼠视网膜PRC细胞核面积、RPE细胞数较C57BL普食组明显减少(P<0.01或0.001),Bruch膜显著增厚(P<0.001),RPE细胞内黑色素含量明显降低(P<0.01或0.001),脂褐素含量明显增高(P<0.001)。多元线性回归分析显示,RPE细胞数与TC、LDL、TG含量呈显著负相关(r=-0.911、-0.888、-0.669,P=0.000、0.00、0.001),黑色素含量与Bruch膜厚度呈明显负相关(r=-0.691,P=0.001),与RPE细胞数、PRC数呈明显正相关(r=0.745、0.408,P=0.000、0.047)。脂褐素含量与Bruch膜厚度呈明显正相关(r=0.830,P=0.000),与RPE细胞数、PRC数呈负相关(r=-0.826、-0.340,P=0.000、0.084)。结论血脂异常ApoE-/-小鼠可出现明显高脂血症,引起视网膜RPE细胞损伤,细胞内黑色素减少、脂褐素增加,导致年龄相关性黄斑变性产生。
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