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目的
构建具备表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的低免疫原性慢病毒载体，以期发挥高效激活T细胞抗肿瘤作用。
方法应用聚合酶链反应(PCR)获取大小分别为851 bp的人端粒酶反转录酶(hTERT)-CMV启动子序列及774 bp的SEA目的基因，将目的基因构建到慢病毒载体质粒中，基因测序正确后，转入感受态细胞DH5α中扩增、收集。利用穿梭质粒和包装质粒共转染293FT细胞中包装病毒，超速离心浓缩法收集病毒上清液，荧光滴度法检测病毒滴度。感染复数(MOI)＝10病毒上清转染膀胱肿瘤细胞BIU-87细胞株，收集PCR产物测序目的基因，Western blot法检测SEA基因表达。
结果载体质粒大小为10 458 bp，基因测序正确，无明显碱基突变。荧光滴度法检测病毒滴度为(4.30±2.00)×109 TU/ml。PCR产物测序目的基因证实目的基因正确，分光光度计检测24、48、96 h总RNA产物分别为742、803、726 mg/L。Western blot结果显示SEA基因成功表达。
结论成功构建携带超抗原SEA基因低免疫原性病毒。