【摘 要】
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在鱼类胚胎发育过程中,胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)起着关键的作用.本研究根据GenBank收录的鲑鳟鱼IGF-Ⅱ基因序列设计引物,以哲罗鱼(Hucho
【机 构】
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中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,上海海洋大学水产与生命学院
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在鱼类胚胎发育过程中,胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)起着关键的作用.本研究根据GenBank收录的鲑鳟鱼IGF-Ⅱ基因序列设计引物,以哲罗鱼(Hucho taimen)肝RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出哲罗鱼IGF-Ⅱ基因开放阅读框.将目的基因IGF-Ⅱ与原核表达载体pSUMO连接构建出重组表达载体pSUMO-IGF.将该重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行目的蛋白的诱导表达.SDS-PAGE电泳分析显示,约在40 kD处含有清晰的条带,与预期结果相符;目的蛋白以包涵体形式存在.对包涵体进行变性/复性后获得较纯的目的蛋白,利用ELISA和MTT方法对目的蛋白进行免疫学活性及生物学活性分析.ELISA结果显示该目的蛋白能够与商品化的抗鲑鳟鱼IGF-Ⅱ的抗体发生特异性反应,并且呈现抗原浓度依赖性,该结果说明本研究获得了具有良好免疫原性的IGF-Ⅱ蛋白;MTT方法测定IGF-Ⅱ蛋白对鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epitheliaomapapulosum cyprini,EPC)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)性腺细胞(rainbow trout gonad,RTG-2)的增殖效果来鉴定IGF-Ⅱ蛋白的生物学活性,结果显示所表达的哲罗鱼IGF-Ⅱ蛋白能够有效的刺激EPC细胞和RTG-2细胞增殖.该结果表明利用原核表达系统获得的哲罗鱼IGF-Ⅱ蛋白具有良好的生物学活性.本研究为哲罗鱼的生长模式和生长繁殖的研究奠定了基础.
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