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为了快速、准确检测鸡滑液囊支原体（MS）,对MS标准株vlhA基因进行分析，设计并合成特异性引物和探针，优化反应条件，构建了基于vlhA基因的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法。结果显示，所构建方法标准曲线所对应的相关系数R~2=1.000,斜率S=-3.452,截距I=43.950,表明标准质粒浓度与Ct值的线性关系良好；该方法除MS外，其他参考菌（毒）株均无目的基因扩增，其最小检测浓度为1×10~1copies/μL,组内重复及组间重复的变异系数均低于0.1;运用所建立方法与普通PCR方法对4份疑似MS临床样本进行检测，检测结果完全相符合；应用该方法对贵州省7个地区107份疑似MS样本进行检测，发现总体阳性率为26.17%。说明建立的方法具有较好的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床检测。