【摘 要】
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用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶(NPT-Ⅱ)基因的质粒pJIT101导入京花1号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理,用微米级的激光微束处理,然后在卡那霉素培养基上
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用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶(NPT-Ⅱ)基因的质粒pJIT101导入京花1号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理,用微米级的激光微束处理,然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年,从150个小麦幼胚中,在卡那霉素培养基上筛选出4株绿苗,取两株进行NPT-Ⅱ酶活性分析,测到了NPT-Ⅱ酶的活性。第二年重复实验,从245个小麦幼胚中,经筛选获得1株绿苗,进行了叶片DNAPCR扩增检测,转化的绿色小苗扩增出所导入的NPT-Ⅱ基因编码的片段。结果表明,外源NPT-Ⅱ基因已导入了小麦,并实现了整合表达。
The plasmid pJIT101 carrying neomycin phosphotransferase (NPT-Ⅱ) gene was introduced into Jinghua No.1 wheat immature embryo by laser microbeam puncture. The method comprises the following steps: pre-treating wheat immature embryo cells with a hypertonic buffer, treating the wheat germ with a micron-sized laser microbeam, and then screening the resistant callus and the green plantlet on a kanamycin medium. In the first year, from the immature embryos of 150 wheat, 4 green shoots were screened on kanamycin medium, and the activity of NPT-II enzyme was measured by analyzing the activity of NPT-II. The second year of repeated experiments, 245 young wheat embryos were screened to obtain a green plant, and the leaf DNAPCR amplification was detected. The transformed green seedlings amplified the imported NPT-Ⅱ gene encoding fragment. The results showed that the exogenous NPT-Ⅱ gene was introduced into wheat and the integrated expression was achieved.
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