【摘 要】
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目的 构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)抗原的DNA疫苗,并在小鼠中测试其免疫原性.方法 运用人密码子优化技术合成甲型H1N1流感病毒HA序列,并转移至DNA疫苗
【机 构】
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唯可达生物科技有限公司,上海,上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心科学研究部
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目的 构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)抗原的DNA疫苗,并在小鼠中测试其免疫原性.方法 运用人密码子优化技术合成甲型H1N1流感病毒HA序列,并转移至DNA疫苗载体,用Western blotting检测其表达效率.采用单纯随机抽样方法把BALB/c小鼠分成DNA疫苗组和对照组.用DNA疫苗免疫疫苗组小鼠,免疫后取小鼠血清和脾细胞,分别用ELISA方法和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)方法检测血清中的特异性抗体应答和脾细胞中的特异性T细胞应答,最后用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和假病毒中和试验分别检测血清中的HI抗体和中和抗体应答.采用t检验作两组之间比较.结果 所构建的DNA疫苗能够高效表达HA蛋白.免疫小鼠后能有效诱导T细胞免疫应答[429 0±113 4斑点形成细胞(spot-forming cell,SFC)/10°脾细胞],血清结合抗体滴度为16127 0±2698.0,HI抗体滴度为100.8±16 9,所有数据均显著高于载体对照(分别为t=3.863,P=0.0042;t=5.734,P=0.0002;t=6.018,P=0.0001).DNA疫苗能活化产生高水平的针对同源H1N1毒株的中和抗体,但不能活化产生针对异源H1N1毒株的中和抗体.结论 本研究构建的DNA疫苗有较好的免疫原性,并能诱导一定水平的保护性抗体产生.
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