【摘 要】
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目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(
【机 构】
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西安医学院人体解剖学教研室,西安交通大学医学部神经生物学研究所,
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目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。
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