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以羰基二咪唑为催化剂,生物素与6-氨基已酸甲酯反应生成生物素-6-氨基已酸甲酯,该化合物通过酸碱萃取与原料分离,皂化后生成生物素氨基已酸,生物素氨基已酸在吡啶存在下与三氟乙酸对硝基苯酯进行转酯反应即得生物素对硝基苯酯。最后经光谱、色谱及核酸杂交证实了长臂生物素对硝基苯酯的化学结构和生物学活性。