目的 探讨体外转染抑制性蛋白IκB激酶2的显性负性突变体(IKK2dn)基因的受者大鼠未成熟树突状细胞(imDC)诱导产生的CD4+ CD25-T细胞致耐受作用的特性及机制.方法 将含IKK2dn基因的腺病毒载体按1:200的感染复数(200 MOI)体外转染受者Lewis大鼠骨髓源性imDC,2d后负载供者BN大鼠抗原,48 h后与受者大鼠T细胞初次混合淋巴细胞反应(MLR),72 h后免疫磁珠法分离筛选混合淋巴细胞反应(MLR)中诱导产生的CD4+ CD25-T细胞,将获得的CD4+ CD25-T细胞与受者大鼠T细胞再次MLR 72h,检测其对T细胞增殖反应的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定MLR上清中白细胞介素(IL)-2、IL-10、转化生长因子(TGF)-β和干扰素(IFN)-γ的水平.结果 Western blot结果显示,转染IKK2dn基因的imDC稳定、高效表达IKK2dn.转染IKK2dn受者imDC诱导产生的CD4+T细胞低表达CD25(18.50±1.40)％,与未转染组(72.20±3.30)％及转染空载体组(63.70±1.80)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05).转染IKK2dn诱导产生的CD4+CD25-T细胞能抑制异种抗原刺激引起的受者T细胞的增殖反应(0.044±0.006),与转染空载体所诱导产生的CD4+T细胞比较(0.419±0.014),差异有统计学意义(P＜0.05).MLR中高比例的CD4+CD25-T细胞能够明显抑制受者T细胞的增殖反应(0.044±0.006),与低比例组比较(0.106±0.006),差异有统计学意义(P＜0.05),且CD4+ CD25-T细胞介导的MLR上清液中IL-10、TGF-β水平明显升高(P＜0.05),IL-2、IFN-γ水平明显降低(P＜0.05).结论 转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者imDC可以诱导受者T细胞产生CD4+ CD25-T细胞,此种CD4+ CD25-T细胞能够引起受者T细胞针对供者抗原的特异性低反应,具有诱导免疫耐受的作用。
转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者未成熟树突状细胞诱导产生的CD4+ CD25- T细胞致耐受特性
【摘 要】
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目的 探讨体外转染抑制性蛋白IκB激酶2的显性负性突变体(IKK2dn)基因的受者大鼠未成熟树突状细胞(imDC)诱导产生的CD4+ CD25-T细胞致耐受作用的特性及机制.方法 将含IKK2dn基因的腺病毒载体按1:200的感染复数(200 MOI)体外转染受者Lewis大鼠骨髓源性imDC,2d后负载供者BN大鼠抗原,48 h后与受者大鼠T细胞初次混合淋巴细胞反应(MLR),72 h后免疫磁珠
【机 构】
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261041潍坊市第二人民医院泌尿外科,苏州大学附属第一医院泌尿外科,苏州大学附属第一医院泌尿外科,苏州大学附属第一医院泌尿外科,苏州大学附属第一医院泌尿外科,北京市门头沟区医院泌尿外科
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2012年29期
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