【摘 要】
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【目的】从天然产物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）活性的天然产物并研究其颉颃作用机制。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒（rSVA-NLuc）与BHK-21细胞，结合荧光素酶高通量筛选技术，建立抗SVA药物体外筛选平台。从天然产物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的天然产物，并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性，通过细胞毒性试
【基金项目】
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中国动物卫生与流行病学中心创新基金（DW2021009）； “十四五”国家重点研发计划（2021YFD180030）；
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【目的】从天然产物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）活性的天然产物并研究其颉颃作用机制。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒（rSVA-NLuc）与BHK-21细胞，结合荧光素酶高通量筛选技术，建立抗SVA药物体外筛选平台。从天然产物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的天然产物，并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性，通过细胞毒性试验确定其最大无毒浓度。选择病毒感染周期的吸附、入胞、复制、组装释放4个主要过程，利用实时荧光定量RT-PCR、50%组织细胞感染量(TCID50)测定等进行天然产物分子颉颃机制研究。【结果】从包含560种天然产物的分子库中筛选出16种候选抗SVA活性分子，通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测，鉴定出4种安全、有效的天然产物，分别为20S-原人参三醇（（20S）-protopanaxatriol）、蕈青霉素（paxilline）、方胆碱（fangchinoline）、竹红菌乙素（hypocrellin B）。作用机制研究显示，20S-原人参三醇能抑制SVA感染过程中的吸附、复制阶段；蕈青霉素在SVA的吸附、入胞、复制、组装释放阶段即整个病毒感染周期均发挥抑制作用；方胆碱能抑制SVA的入胞、复制；竹红菌乙素能抑制SVA的吸附、入胞、复制及组装释放阶段。【结论】本试验从天然产物库中筛选出了4种具有抗SVA活性的天然产物，这些化合物抗病毒效果良好，且作用机制各有不同。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。
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