【摘 要】
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目的 建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性
【机 构】
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第二军医大学附属长征医院,实验诊断科、全军临床免疫中心,上海200003
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目的 建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)发生发展的关系.方法 基于TaqMan荧光探针技术,构建质粒pET28a-GNLY,作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法.用此方法测定了60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化及60例健康对照者外周血中GNLY mRNA的含量.结果 PBC患者GNLY mRNA的表达范围为5.35×107-4.61×109拷贝/μgRNA;健康对照者为9.28×105-7.32×107拷贝/μg RNA.PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组(P＜0.01)和疾病对照乙型肝炎肝硬化组(P＜0.001).结论 成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,PBC患者GNLYmRNA的含量显著高于健康对照组,GNLY表达与PBC的发生发展存在一定的关联性.
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