【摘 要】
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从人血清白蛋白HSA免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA,通过反转录得到c DNA,经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列,通过
【机 构】
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江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31570034),863项目(2015AA020802),973项目(2013CB733602),中央高校基本科研业务费专项资助(JUSRP51401A)
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从人血清白蛋白HSA免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA,通过反转录得到c DNA,经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列,通过基因重组的方法将鼠源Fab段VH和VL与人源Fab段重链和轻链恒定区进行嵌合,获得人源化嵌合单链抗体(Single-chain Antibody Fragment,sc Fv),将sc Fv克隆到构建的表达载体p BY中导入到宿主菌BL21-trx B(DE3)中进行可溶性表达,在摇瓶水平通过对发酵条件进行优化,胞内可溶性
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