【摘 要】
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目的 制备H4亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体(mAb),基于mAb建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法.方法 用灭活H4亚型AIV免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、血凝抑制(HI)试验筛选
【机 构】
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广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001
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目的 制备H4亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体(mAb),基于mAb建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法.方法 用灭活H4亚型AIV免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、血凝抑制(HI)试验筛选和亚克隆,得到了一株抗H4亚型AIV mAb(6G4).免疫荧光细胞化学染色和Western blot法验证6G4与H4亚型AIV的反应性,HI试验鉴定6G4特异性、广谱性和稳定性,试剂盒鉴定6G4亚类.以鸡抗H4亚型AIV多克隆抗体作为包被抗体,6G4作为捕获抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG作为酶标抗体,通过条件优化和一系列验证,建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法.结果 6G4亚类为IgG1,轻链为K链,能稳定分泌抗体,具有良好的反应性、特异性、广谱性和稳定性;基于6G4建立的ELISA特异性强、敏感性高、重复性好,适合大批量检测.结论 成功制备了抗H4亚型AIV的mAb,建立了检测H4亚型AIV的夹心ELISA.
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