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目的
制备针对Toll样受体4(TLR4)胞外C端结构域的单克隆抗体，并探讨抗TLR4 C端单克隆抗体对脓毒症的影响。
方法原核表达、丙烯葡聚糖凝胶(Sephacryl S－100)纯化获得大鼠来源的TLR4 C端多肽(氨基酸序列：368－579，命名为TLR4－C)，免疫6～8周雌性Balb/c小鼠，经细胞融合、抗体筛选、纯化等程序制备抗TLR4－C单克隆抗体，采用Western印迹、细胞免疫荧光对制备的TLR4－C单克隆抗体进行特异性检测。通过细胞实验和脓毒症动物模型实验进行抗体活性测定。(1)细胞实验：100 μg/ml抗体加入培养的NR8383作用1 h，加入10 ng/ml脂多糖(LPS)继续培养12 h后，ELISA检测培养基中肿瘤坏死因子－α(TNF－α)的释放水平；(2)脓毒症动物模型实验：40只SD大鼠按随机数字表法分为对照抗体组、B－D5抗体组，每组尾静脉分别注射50 mg/kg相应抗体，1 h后经腹腔给予10 mg/kg致脓毒症剂量的LPS，4 h后检测两组血清TNF－α含量，并连续72 h观察两组动物存活情况。
结果获得3株特异性高、且能结合TLR4－C和TLR4全蛋白的抗TLR4－C单克隆抗体。细胞活性测定显示，1株单克隆抗体(B－D5)能明显抑制细胞TNF－α的释放，其余2株对抑制细胞TNF－α的作用较弱。动物模型实验显示，B－D5抗体组TNF－α水平为(1.54±0.18)ng/ml，明显低于对照抗体组的(0.51±0.10)ng/ml(P<0.01)，B－D5抗体组存活率(70%)明显高于对照抗体组(30%)(P<0.05)。
结论制备的抗TLR4 C端单克隆抗体具有很好的TLR4中和作用，明显提高大鼠的存活率，对LPS诱发的脓毒症具有较好的保护作用。