【摘 要】
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在蓝藻合成生物学中,对大片段进行无标记删除可以加快基因组简化的进程.研究以聚球藻PCC 7942为材料,基于同源重组技术对基因组中大于10 kb的3个非必需区域进行无标记删除.构建带有两侧同源片段的不可在聚球藻复制的质粒,利用接合转移将其导入藻细胞获得同源单交换株,再借助于条件致死基因sacB筛选第二步交换的克隆,获得无标记删除突变株.研究证明了传统的同源重组和筛选技术可用于蓝藻基因组的大片段无标记删除.
【机 构】
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中国科学院水生生物研究所中国科学院藻类生物学重点实验室, 武汉 430072;中国科学院大学, 北京 100049;中国科学院水生生物研究所中国科学院藻类生物学重点实验室, 武汉 430072
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在蓝藻合成生物学中,对大片段进行无标记删除可以加快基因组简化的进程.研究以聚球藻PCC 7942为材料,基于同源重组技术对基因组中大于10 kb的3个非必需区域进行无标记删除.构建带有两侧同源片段的不可在聚球藻复制的质粒,利用接合转移将其导入藻细胞获得同源单交换株,再借助于条件致死基因sacB筛选第二步交换的克隆,获得无标记删除突变株.研究证明了传统的同源重组和筛选技术可用于蓝藻基因组的大片段无标记删除.
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