用于CRISPR文库筛选的N2a-Cas9细胞系的构建

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：iamwoceo

【摘要】

：

为了进行CRISPR文库筛选,本研究采用慢病毒转导的方法利用N2a细胞构建表达Cas9蛋白的N2a-Cas9单克隆细胞系。实验将LentiCas9-Blast、pSPA X2和pMD 2.G 3种质粒共转染人胚胎

【作者】

：

张纪文王露露李芳刘杏赵东明步志高

【机构】

：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

【出处】

：

中国预防兽医学报

【发表日期】

：

2020年12期

【关键词】

：

基因编辑慢病毒高通量筛选鼠神经瘤母细胞 gene editing lentivirus genome-wide CRISPR screening muri

【基金项目】

：

兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP201801)

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为了进行CRISPR文库筛选,本研究采用慢病毒转导的方法利用N2a细胞构建表达Cas9蛋白的N2a-Cas9单克隆细胞系。实验将LentiCas9-Blast、pSPA X2和pMD 2.G 3种质粒共转染人胚胎肾细胞(HEK293T)获取高滴度的重组慢病毒,收集重组慢病毒并感染N2a细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,通过有限稀释法获得含有Cas9基因的多个单克隆细胞株。Western blot结果显示候选细胞系高水平表达Cas9蛋白;利用慢病毒表达报告基因载体系统检测显示候选细胞系的Ca

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