【摘 要】
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目的研究慢性高糖对小鼠巨噬细胞的影响及机制。方法以正常生长液和含（40、60）mmol/L葡萄糖的生长液培养小鼠RAW264.7巨噬细胞1、3、5、7 d,相差显微镜观察细胞形态, CCK-8法检测细胞增殖能力, Western blot法检测细胞白细胞介素1β（IL-1β）和IL-10蛋白水平, ELISA检测培养细胞上清液IL-1β和IL-10分泌量;实时定量PCR法检测细胞蛋白激酶B（AKT
【基金项目】
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江苏省高校自然科学研究面上项目（18KJB180013）；
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目的研究慢性高糖对小鼠巨噬细胞的影响及机制。方法以正常生长液和含（40、60）mmol/L葡萄糖的生长液培养小鼠RAW264.7巨噬细胞1、3、5、7 d,相差显微镜观察细胞形态, CCK-8法检测细胞增殖能力, Western blot法检测细胞白细胞介素1β（IL-1β）和IL-10蛋白水平, ELISA检测培养细胞上清液IL-1β和IL-10分泌量;实时定量PCR法检测细胞蛋白激酶B（AKT）mRNA水平,Western blot法检测细胞AKT、磷酸化的AKT（p-AKT）蛋白水平。结果 60 mmol/L葡萄糖处理1 d即出现较多长梭形细胞,可见伸展的伪足,且随时间延长数量增加、体积变大;处理1 d即明显抑制细胞增殖,随时间延长抑制效果有所改善;处理3、5、7 d后, IL-1β蛋白水平增加、IL-10蛋白水平降低;处理1 d后IL-1β分泌显著增加,但处理3 d后IL-10分泌显著减少且随时间延长进一步减少;处理3、5、7 d后,AKT蛋白磷酸化被抑制,但AKT mRNA水平未见明显变化。40 mmol/L葡萄糖处理在一定程度上发挥作用,但不如60 mmol/L葡萄糖显著和稳定。结论长期高糖刺激诱导巨噬细胞向促炎性M1型转变,诱发巨噬细胞的持续慢性炎症反应,其机制可能与抑制AKT蛋白磷酸化激活有关。
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