【摘 要】
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猪α干扰素具有抗病毒作用,临床上具有广阔的应用前景。为获得重组猪α干扰素,本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪α干扰素基因插入供体质粒pFastBacTMⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将重组转移载体质粒转化DH10感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组蛋白通过间接免疫
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室
【基金项目】
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国家“十一五”科技支撑计划专项基金资助（2006BAD06A08）； 郑州市创新型科技人才队伍建设工程基金资助（096SYJH16092）；
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猪α干扰素具有抗病毒作用,临床上具有广阔的应用前景。为获得重组猪α干扰素,本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪α干扰素基因插入供体质粒pFastBacTMⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将重组转移载体质粒转化DH10感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blotting证明在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得表达。镍亲和层析柱纯化的重组蛋白经SDS-PAGE电泳相对分子质量为19 000。通过在猪肾细胞（PK-15）上抑制猪水泡性口炎病毒（VSV）致病变作用检测其抗病毒活性为9.67×104U/mL。昆虫培养上清及细胞裂解液经28稀释在Marc-145细胞上能够抑制猪蓝耳病病毒增殖。从而为进一步作为抗病毒药物应用于猪疫病的防治研究奠定了基础。
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