【摘 要】
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本试验旨在利用原核表达系统表达基因Ⅱ型鹅星状病毒（goose astrovirus，GoAstV）ORF2蛋白，制备兔源多克隆抗体，并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。根据GoAstV-GDZJ37株ORF2基因序列设计特异性表达引物，利用RT-PCR方法进行目的基因扩增，将其连接至原核表达载体pET-32a（+）；经酶切鉴定和测序正确后，转化至表达感受态细胞，并进行诱导表达及SDS-PAGE分析。
【基金项目】
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广东省基础与应用基础研究基金资助项目（2022A1515012194）;广东省基础与应用基础研究区域联合基金-青年基金资助项目（2019A1515110157）； 广东省教育厅普通高校重点领域专项（乡村振兴）基金资助项目（2020ZDZX1004）； 广东省水禽产业技术体系创新团队基金资助项目（2023KJ137）；
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本试验旨在利用原核表达系统表达基因Ⅱ型鹅星状病毒（goose astrovirus，GoAstV）ORF2蛋白，制备兔源多克隆抗体，并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。根据GoAstV-GDZJ37株ORF2基因序列设计特异性表达引物，利用RT-PCR方法进行目的基因扩增，将其连接至原核表达载体pET-32a（+）；经酶切鉴定和测序正确后，转化至表达感受态细胞，并进行诱导表达及SDS-PAGE分析。以无His标签的ORF2蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔，制备兔源多克隆抗体。将含His标签的ORF2蛋白经Ni-NTA亲和层析法进行纯化，并以纯化后的蛋白作为检测原，通过I-ELISA方法检测兔源多克隆抗体的效价，并通过Western-blot及IFA检测方法鉴定其特异性。结果显示，克隆获得GoAstV-GDZJ37株ORF2基因，并利用原核表达系统分别表达两种重组蛋白，大小分别为77，95 kDa，且均为不可溶性表达。I-ELISA结果显示，多克隆抗体的效价为1:102 400，表明无His标签的ORF2蛋白具有良好的免疫原性；Western blot及IFA结果显示，多克隆抗体可与含His标签的ORF2蛋白及GoAstV毒株均能发生特异性反应，表明制备的多抗具有良好的反应性。本试验成功建立GoAstV ORF2蛋白原核表达系统，并制备高效价兔源多克隆抗体，为后续GoAstV血清学诊断及GoAstV致病机制的深入研究提供技术支撑及物质基础。
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