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摘要：
目的：探讨半枝莲对AFB1致体外肝细胞毒性的保护作用及其机制。方法：通过采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法检测AFB1对人肝癌细胞株Huh7.5细胞的生长抑制率，再用MTT法观察半枝莲作用下AFB1诱导的Huh7.5细胞增殖功能的影响，然后检测细胞内丙二醛含量（ MDA） 、红细胞超氧化物歧化酶（ SOD）的水平以观察半枝莲对AFB1引起的Huh7.5细胞凋亡及脂质过氧化损伤的保护作用。结果：AFB1能显著抑制Huh7.5细胞增殖，IC50为15μg/ mL；而半枝莲能显著抑制AFB1暴露细胞的凋亡（P < 0.01）。半枝莲能明显降低AFB1作用下肝细胞内MDA 含量， 提高其SOD活性， 与对照组比较差异有显著性（P <0.01）。结论：半枝莲对AFB1致Huh7.5细胞损伤具有保护作用，其机制与抑制肝细胞凋亡及对抗脂质过氧化有关。
关键词：半枝莲； 黄曲霉毒素（AFB1）；Huh7.5细胞；抗氧化作用
Inhibitory effect of Scutellariae barbata extract on hepatocytes apoptosis and lipid peroxidation induced by aflatoxin B1
Affiliated Zhongshan Hospital of Sun Yat-Sen University，Zhongshan， Guangdong 528403
【Abstract】
Objective：To study the mechanisms by which the Scutellariae barbata extract inhibit AFB1-induced toxicity in human hepatocytes. Methods：The MTT assay was performed to test the inhibitory rate of cell growth induced by AFB1. Then the cell survival effects of Scutellariae barbata extract were measured by using MTT on cells exposed to AFB1. Finally， the concentration of the product of lipid peroxidation malondialdehyde（ MDA） and the activity of superoxide dismutase（ SOD） were measured in Huh7.5 cells. Results：AFB1 exhibited significant cytotoxicity to Huh7.5 cells in dose- and time- dependent manners. Treatment with Scutellariae barbata extract could effectively inhibited the apoptosis of the cell， decrease the concentration of MDA and improve the activity of SOD. Conclution：The extracts of Scutellariae barbata protect HepG2 cells from the cytotoxicity of AFB1 which may relate to the possible underlying mechanisms of anti-apoptosis and antioxidation.
【Key words】Scutellariae barbata； AFB1； Huh7.5 cells； antioxidation
【中图分类号】
R114 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）05-0002-02
半枝莲，为唇形科植物半枝莲的全草，又名韩信草，分布于我国南方各省区。半枝莲提取物含有生物碱、黄酮类甙、甾体以及酚类、鞣质等。其所含的半枝莲素，系一种黄酮类化合物（2，5-二羟基-6，7，8-三甲氧基黄酮），此外，还有另两种黄酮类化合物汉黄苓素（5，7-二羟基-8甲氧基黄酮）和5-羟基-7， 8-二甲氧基黄酮[1]。体内实验表明，半枝莲的醇提物对于小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22细胞抑制其肿瘤增殖活性作用显著，并且对脾细胞增殖有促进作用[2]。体外研究也证实半枝莲可抑制肝癌细胞增殖，并诱导凋亡[3-5]。但对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导的细胞毒性的保护作用尚未见报到。AFB1是粮食中最常见的真菌毒素，被公认为与HCC发生密切相关的重要因素之一。研究表明AFB1对肝等主要脏器损伤的原因之一与其造成机体自由基代谢发生变化有密切的关系。自由基与许多疾病的发生和发展联系密切，主要机制是通过生物膜中的多价不饱和脂肪酸的过氧化反应，导致脂质过氧化物增多，引起细胞损伤，致使细胞代谢功能障碍，并最终引起器官功能发生改变[6]。本试验旨在研究体外肝细胞加入AFB1后，对细胞增殖功能及抗氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响，以及半枝莲对AFB1中毒的拮抗效应，为半枝莲在临床上防治黄曲霉毒素B1中毒提供理論依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料、药品及试剂：
Huh7.5细胞株，由本院肿瘤实验室保存。半枝莲半购自广州市药材公司；AFB1、DMSO、HEPES及MTT为Sigma公司产品；DMEM 培养基为GIBCO公司产品；SOD、MDA试剂盒购于南京建成工程研究所。
目的：探讨半枝莲对AFB1致体外肝细胞毒性的保护作用及其机制。方法：通过采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法检测AFB1对人肝癌细胞株Huh7.5细胞的生长抑制率，再用MTT法观察半枝莲作用下AFB1诱导的Huh7.5细胞增殖功能的影响，然后检测细胞内丙二醛含量（ MDA） 、红细胞超氧化物歧化酶（ SOD）的水平以观察半枝莲对AFB1引起的Huh7.5细胞凋亡及脂质过氧化损伤的保护作用。结果：AFB1能显著抑制Huh7.5细胞增殖，IC50为15μg/ mL；而半枝莲能显著抑制AFB1暴露细胞的凋亡（P < 0.01）。半枝莲能明显降低AFB1作用下肝细胞内MDA 含量， 提高其SOD活性， 与对照组比较差异有显著性（P <0.01）。结论：半枝莲对AFB1致Huh7.5细胞损伤具有保护作用，其机制与抑制肝细胞凋亡及对抗脂质过氧化有关。
关键词：半枝莲； 黄曲霉毒素（AFB1）；Huh7.5细胞；抗氧化作用
Inhibitory effect of Scutellariae barbata extract on hepatocytes apoptosis and lipid peroxidation induced by aflatoxin B1
Affiliated Zhongshan Hospital of Sun Yat-Sen University，Zhongshan， Guangdong 528403
【Abstract】
Objective：To study the mechanisms by which the Scutellariae barbata extract inhibit AFB1-induced toxicity in human hepatocytes. Methods：The MTT assay was performed to test the inhibitory rate of cell growth induced by AFB1. Then the cell survival effects of Scutellariae barbata extract were measured by using MTT on cells exposed to AFB1. Finally， the concentration of the product of lipid peroxidation malondialdehyde（ MDA） and the activity of superoxide dismutase（ SOD） were measured in Huh7.5 cells. Results：AFB1 exhibited significant cytotoxicity to Huh7.5 cells in dose- and time- dependent manners. Treatment with Scutellariae barbata extract could effectively inhibited the apoptosis of the cell， decrease the concentration of MDA and improve the activity of SOD. Conclution：The extracts of Scutellariae barbata protect HepG2 cells from the cytotoxicity of AFB1 which may relate to the possible underlying mechanisms of anti-apoptosis and antioxidation.
【Key words】Scutellariae barbata； AFB1； Huh7.5 cells； antioxidation
【中图分类号】
R114 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）05-0002-02
半枝莲，为唇形科植物半枝莲的全草，又名韩信草，分布于我国南方各省区。半枝莲提取物含有生物碱、黄酮类甙、甾体以及酚类、鞣质等。其所含的半枝莲素，系一种黄酮类化合物（2，5-二羟基-6，7，8-三甲氧基黄酮），此外，还有另两种黄酮类化合物汉黄苓素（5，7-二羟基-8甲氧基黄酮）和5-羟基-7， 8-二甲氧基黄酮[1]。体内实验表明，半枝莲的醇提物对于小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22细胞抑制其肿瘤增殖活性作用显著，并且对脾细胞增殖有促进作用[2]。体外研究也证实半枝莲可抑制肝癌细胞增殖，并诱导凋亡[3-5]。但对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导的细胞毒性的保护作用尚未见报到。AFB1是粮食中最常见的真菌毒素，被公认为与HCC发生密切相关的重要因素之一。研究表明AFB1对肝等主要脏器损伤的原因之一与其造成机体自由基代谢发生变化有密切的关系。自由基与许多疾病的发生和发展联系密切，主要机制是通过生物膜中的多价不饱和脂肪酸的过氧化反应，导致脂质过氧化物增多，引起细胞损伤，致使细胞代谢功能障碍，并最终引起器官功能发生改变[6]。本试验旨在研究体外肝细胞加入AFB1后，对细胞增殖功能及抗氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响，以及半枝莲对AFB1中毒的拮抗效应，为半枝莲在临床上防治黄曲霉毒素B1中毒提供理論依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料、药品及试剂：
Huh7.5细胞株，由本院肿瘤实验室保存。半枝莲半购自广州市药材公司；AFB1、DMSO、HEPES及MTT为Sigma公司产品；DMEM 培养基为GIBCO公司产品；SOD、MDA试剂盒购于南京建成工程研究所。