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目的建立防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术,并用于布鲁氏菌及其模拟感染组织中细菌的检测.方法根据布鲁氏菌31 kD热休克蛋白和外膜蛋白2B(OMP2B)基因设计引物,筛选合适引物,并建立用脲嘧啶糖基化酶防污染的PCR扩增-微孔板杂交与酶联显色检测布鲁氏菌的方法,并用于模拟污染布鲁氏菌动物脏器标本的检测.结果根据布鲁氏菌31 kD热休克蛋白和外膜蛋白2B基因设计的引物,建立了复合PCR,同时检测2个基因的存在,并发现不同引物序列对PCR扩增敏感性影响较大,可以相差1 000倍.用0.5 U的UDG可以防止108产物的污染,微孔板杂交-酶联显色检测比单纯PCR-电泳敏感10倍.将该体系用于污染动物脏器的检测,可以检测出反应体系中2～200个细菌的存在.结论研究的防污染PCR-微孔板杂交-EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便、产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点,为布鲁氏菌的快速检测提供了一个有力手段.