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为降低香草提取的成本，一些制造商使用合成或人工香料替代更为昂贵的纯香草。很多时候，这些便宜的替代品包含合成成分，例如乙基香草醛。但某些提取物含有潜在危害性掺杂物，其中包括香豆素，即零陵香豆散发出的香味。这种特殊的掺杂物是一种可疑致癌物，可以与血液稀释药物发生反应。在美国，香豆素已被禁止用做食品成分，美国食品药品监督管理局针对近年来其在香草提取物中的滥用发出了消费者警告。
现在已开发出大量的反相液相色谱（RPLC）方法用于分析，以确定香草提取物中的真实成分。这些方法能够筛选出合成和人工香料，以及香草醛的次生成分，后者是香草豆荚正宗提取物的标志物。这些方法可实现高通量分析，正交分离可依据不同的选择性带来便利。UPC2？技术针对香草醛的强极性、次生成分的保留性更强，能够对潜在危害性非极性掺杂物进行充分保留和鉴定。例如在反相分离中，某些香草醛次生化合物（例如香草酸）的保留性很差，使得这些极性成分的分离很困难。在合相色谱法中，各组分的洗脱性能相反，从而实现了强极化化合物更长的保留时间以及更好的分离度。
解决方案
使用含有来自香草豆荚（香草醛，对羟基苯甲酸，对羟基苯甲醛和香草酸）的香味成分，以及合成香草醛（乙基香草醛）和禁用掺杂物香豆素的标准溶液进行方法开发。标准溶液由异丙醇制备。实验采用ACQUITY UPC2TM BEH 2-EP 130？ 3.0x100mm，1.7μm色谱柱开发出一个2.5min的方法，如图1所示。UV方法条件中使用了20mm柠檬酸的甲醇溶液作为改性剂/添加剂，用以改善酸性成分的峰形。
实验针对UV方法的重复性（表1）和线性（表2）进行了评估。配制0.250～500μg/mL的标准溶液，在12.5μg/mL浓度下，保留时间的重复性（n=5）≤0.10%RSD，相同标准溶液进样的峰面积重复性为<1.80%RSD。线性范围涵盖两至三个数量级，与分析物相关，R2>0.999（表2）。被测分析物的定量限（LOQ）的范围在0.250～1.25μg/mL之间。如果在分析香草提取物时需要稀释样品，使用UV法可满足此特定分析的灵敏度要求。
为检测掺杂物，将此方法用于筛选来自不同地理区域的香草提取物（包括标记为“纯品”和“仿制品”的样品），见图2。使用乙醇对香草提取物进行10倍稀释（样品混溶），并在分析前过滤。来自美国的香草提取物仿制品（A）的分析结果显示：同时存在合成香草醛（乙基香草醛）和香草醛。由于此样品中不存在其他天然香料成分，说明香草醛极有可能是合成的。在美国之外购得的已知香草提取物的伪造品（B）含有掺杂的香豆素以及香草醛，由于不含次生香草成分，因此也很可能来源于合成。最后，标记为“纯品”的香草提取物（C）的分析结果确认其为真品。此样品中同时鉴定出了香草醛和次生天然香料成分，并进行了定量分析。此外，香草醛和对羟基苯甲醛的比值为14.9，位于纯正香草提取物之前的指示范围内（表3）。
总 结
Waters ACQUITY UPC2系统采用CO2流动相配合有机共溶剂和添加剂，可为RPLC提供正交选择性。对于香草提取物的分析，此项分离技术使香草醛的强极性、次生成分的保留性更强，并对非极性掺杂物进行充分的保留和鉴定。此外，相比于传统的RPLC法，此项色谱技术可提高效率、降低溶剂用量，同时是一种适用于分析香草提取物的高通量、灵敏的筛选方法。
现在已开发出大量的反相液相色谱（RPLC）方法用于分析，以确定香草提取物中的真实成分。这些方法能够筛选出合成和人工香料，以及香草醛的次生成分，后者是香草豆荚正宗提取物的标志物。这些方法可实现高通量分析，正交分离可依据不同的选择性带来便利。UPC2？技术针对香草醛的强极性、次生成分的保留性更强，能够对潜在危害性非极性掺杂物进行充分保留和鉴定。例如在反相分离中，某些香草醛次生化合物（例如香草酸）的保留性很差，使得这些极性成分的分离很困难。在合相色谱法中，各组分的洗脱性能相反，从而实现了强极化化合物更长的保留时间以及更好的分离度。
解决方案
使用含有来自香草豆荚（香草醛，对羟基苯甲酸，对羟基苯甲醛和香草酸）的香味成分，以及合成香草醛（乙基香草醛）和禁用掺杂物香豆素的标准溶液进行方法开发。标准溶液由异丙醇制备。实验采用ACQUITY UPC2TM BEH 2-EP 130？ 3.0x100mm，1.7μm色谱柱开发出一个2.5min的方法，如图1所示。UV方法条件中使用了20mm柠檬酸的甲醇溶液作为改性剂/添加剂，用以改善酸性成分的峰形。
实验针对UV方法的重复性（表1）和线性（表2）进行了评估。配制0.250～500μg/mL的标准溶液，在12.5μg/mL浓度下，保留时间的重复性（n=5）≤0.10%RSD，相同标准溶液进样的峰面积重复性为<1.80%RSD。线性范围涵盖两至三个数量级，与分析物相关，R2>0.999（表2）。被测分析物的定量限（LOQ）的范围在0.250～1.25μg/mL之间。如果在分析香草提取物时需要稀释样品，使用UV法可满足此特定分析的灵敏度要求。
为检测掺杂物，将此方法用于筛选来自不同地理区域的香草提取物（包括标记为“纯品”和“仿制品”的样品），见图2。使用乙醇对香草提取物进行10倍稀释（样品混溶），并在分析前过滤。来自美国的香草提取物仿制品（A）的分析结果显示：同时存在合成香草醛（乙基香草醛）和香草醛。由于此样品中不存在其他天然香料成分，说明香草醛极有可能是合成的。在美国之外购得的已知香草提取物的伪造品（B）含有掺杂的香豆素以及香草醛，由于不含次生香草成分，因此也很可能来源于合成。最后，标记为“纯品”的香草提取物（C）的分析结果确认其为真品。此样品中同时鉴定出了香草醛和次生天然香料成分，并进行了定量分析。此外，香草醛和对羟基苯甲醛的比值为14.9，位于纯正香草提取物之前的指示范围内（表3）。
总 结
Waters ACQUITY UPC2系统采用CO2流动相配合有机共溶剂和添加剂，可为RPLC提供正交选择性。对于香草提取物的分析，此项分离技术使香草醛的强极性、次生成分的保留性更强，并对非极性掺杂物进行充分的保留和鉴定。此外，相比于传统的RPLC法，此项色谱技术可提高效率、降低溶剂用量，同时是一种适用于分析香草提取物的高通量、灵敏的筛选方法。