【摘 要】
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目的 探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法.方法 采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Perco
【机 构】
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400715重庆,西南大学生命科学学院;400038重庆,陆军军医大学西南医院感染病科感染病研究重庆市重点实验室;400038重庆,陆军军医大学西南医院感染病科感染病研究重庆市重点实验室
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目的 探讨采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法.方法 采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,Percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴性分选纯化单核细胞.流式细胞术检测细胞CD14和CD16的表达,分析单核细胞分离纯度.M-CSF诱导单核细胞分化为巨噬细胞.IFN-γ诱导巨噬细胞促炎性分化后,流式细胞术分析共刺激分子及HLA-DR的表达,RT-qPCR检测其细胞因子表达.结果 Percoll分离结合免疫磁珠阴性分选分离出纯度为93.1％±1.5％的单核细胞.分离出的单核细胞呈煎蛋形,能成功分化为体积大、黏附力强、且呈纺锤状的巨噬细胞.与对照组相比,巨噬细胞在IFN-γ刺激下促炎性分化后,共刺激分子及HLA-DR表达显著上调,TNF-α、IL-6、CXCL10和CXCL11 mRNA表达也均显著上调.结论 Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠阴性分选能分离出高纯度且具有功能活性的单核细胞.
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