检测miR-34b在儿童急性白血病(AL)中的甲基化状态及表达情况,并探讨其临床意义。
方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测miR-34b启动子区CpG岛在儿童AL中的甲基化状态,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34b的相对表达量并与正常对照组比较,分析其与临床指标间的关系。
结果8种白血病细胞株(U937、HL-60、MV4-11、M2R、K562、Raji、CCRF、DAMI)均出现甲基化现象,其甲基化阳性率为100%。儿童初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿31例,其中24例出现甲基化现象,甲基化阳性率为77.42%(24/31例),儿童初诊急性髓细胞白血病(AML)患儿19例,其中8例出现甲基化现象,甲基化阳性率为42.11%(8/19例),23例正常对照患儿,无一例出现甲基化现象。miR-34b在正常对照组、白血病细胞株组、ALL组、AML组及混合谱系白血病基因重排阳性(MLL+)组的相对表达量分别为5.22±1.15、0.03±0.03、1.65±0.69、0.18±0.06、0.64±0.34,ALL组(P<0.05)、白血病细胞株组、AML组及MLL+组(P均<0.01)与正常对照组相比差异均有统计学意义。miR-34b的相对表达量与儿童初诊AML患儿的性别、年龄、初诊时白细胞(WBC)计数、染色体、融合基因、MLL基因重排及初诊时乳酸脱氢酶(LDH)水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。miR-34b的相对表达量与儿童初诊ALL患儿的性别、年龄、初诊时WBC计数、免疫分型、染色体、融合基因、MLL基因重排、TEL/AML1基因、危险度分层、第33天微小残留病(MRD)及初诊时LDH水平与miR-34b的相对表达量之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。但在泼尼松试验反应方面,敏感组与不敏感组之间差异有统计学意义(P<0.05)。
结论miR-34b在儿童AL表达量明显减低并受甲基化机制调控,提示miR-34b可能作为抑癌基因参与儿童AL的形成。miR-34b的表达量影响儿童初诊ALL早期治疗反应,提示其可能成为判定儿童初诊ALL危险度和不良预后的一个指标。