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目的
构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3, CVB3)，以实现定量检测CVB3。
方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置，重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序，评价重组病毒的荧光素酶表达，扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力。
结果成功构建2个重组病毒质粒，转染HeLa细胞，表达海肾荧光素酶(humanized form of Renilla Luc, hRLuc)、荧火虫荧光素酶(firefly luciferase, Luc)的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性，但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变。扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性。扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变，且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性。用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定，CVB3-hRLuc的毒力为1.4(107pfu/ml)。
结论成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc，为定量研究CVB3感染打下基础。