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摘 要:目的:测定不同产地栀子中栀子苷的含量。方法:采用外标法,大连依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-水(15∶85),流速为1.0mL/min,柱温25℃,检测波长为238nm。结果:测得7产地的10批栀子中栀子苷含量最高为7.06%,最低为2.89%。结论:不同产地栀子中栀子苷含量由于土壤等各种因素的影响,差异较为明显。
关键词:栀子;栀子苷;高效液相色谱法
中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)06-0020-02
栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实,为临床常用中药,其性寒味苦,无毒,入心、肝、肺、三焦经,具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效。栀子药理研究表明其具有抗炎、镇静、镇痛、保肝利胆、抗凝血等作用[1],环烯醚萜类化合物和二萜色素类化合物是栀子的主要成分,也是其主要生物活性物质。栀子苷是栀子的主要活性成分,具有抗炎、解热、利胆等作用;水提取物有利胆、降压、抗菌消炎作用;醇提取物有解热、镇静作用。本文建立了HPLC测定栀子中栀子苷含量的方法[2],对7产地的10批栀子中栀子苷含量进行了测定,为中药栀子的质量评价提供科学依据。
1 仪器与试药
美国Agillent 1100高效液相色谱仪,二级阵列检测器,1100色谱工作站。栀子苷(Geniposide)对照品(批号110749-200309)购自中国药品生物制品检定所。乙腈和甲醇均为色谱纯,水为纯化水。药材及中试饮片样品购自不同产地,其中江西泰和、江西秀谷、浙江淳安各2批,江西永丰、湖南浏阳、浙江苍南、福建贯岭各1批。经广东食品药品职业学院中药标本馆鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
大连依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱。流动相:乙腈-水(15∶85),流速为1.0mL/min,柱温25℃,检测波长为238nm,进样量10μL。色谱图见图1。
t / min
2.2 对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品0.74mg,置于20mL容量瓶中,用50%甲醇溶解定容至刻度,制成含有栀子苷0.037mg/mL的储备液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
称取栀子粉末(过2号筛)约0.50g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定质量,超声20min,放凉,补重,用0.45μm微孔滤膜过滤即可进样。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取栀子苷对照品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,在上述色谱条件下进行分析,以栀子苷色谱峰面积(Y)对质量浓度(X)绘制标准曲线。结果表明:栀子苷在0.74~37μg/mL范围内,峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1153X+17.045,r=0.9996。
2.5 精密度试验
精密吸取栀子供试品溶液,在上述色谱条件下连续进样6次,分别测定栀子苷的峰面积,结果RSD为:0.09%。
2.6 重现性试验
取栀子6份各约0.50g,精密称定,按“2.3”项下操作,按上述色谱条件测定各样品的峰面积,计算各对照品的质量分数,栀子苷的RSD为:0.87%。
2.7 稳定性试验
取栀子供试品溶液,分别于0、1、2、4、6、8h在上述色谱条件下进样分析。计算栀子苷的含量,RSD为:0.18%,结果表明供试品在8h内稳定(n=6)。
2.8 加样回收率试验
称取已知量的栀子药材粉末约0.20g,精密称定,分别按相当于药材中栀子苷100%的量加入对照品溶液,按“2.3”项下操作,配制成高、中、低3个水平的加样供试品溶液(各水平平行操作3份),在上述色谱条件下进样分析,计算回收率。栀子苷的平均回收率为100.88%,RSD为1.75%。
2.9 样品测定
按上述方法对各产地栀子进行测定,进样量为10μL,以外标法计算栀子苷的含量。结果见表1。
3 讨论
(1)本文利用DAD检测器获得栀子苷的HPLC图谱;出峰时间适中,峰形对称,分离度符合要求;所用样品含量测定提取方法的方法学考察符合要求;简化了栀子含量测定的繁琐步骤,为探索制订完善栀子原药材、炮制饮片的质量标准提供了依据。检测结果表明:不同产地栀子含量差别明显,福建产栀子苷含量较高,为7.06%;江西永丰产栀子苷较低,为2.89%。2005年版药典规定栀子中栀子苷(C17H24O10)含量不得低于1.8%[3],说明10批药材含量均符合标准要求,但同时表明药材产地的不同环境和土壤条件对药材内在活性成分影响明显。
(2)检测波长的选择:经过Agilent 1100 DAD三维图谱分析,栀子苷在238nm处有最大吸收,因此确定238nm为其检测波长。
(3)流动相的选择:本实验曾经试过乙腈-水、甲醇-水等不同的流动相系统,发现乙腈-水系统可获得较好峰形和适合的极性范围;进而尝试了不同的乙腈-水流动相比例,结果乙腈-水(15∶85)流动相洗脱,获得较好的分离,3个成分的分离度均大于1.5,拖尾因子在0.95～1.05。
(4)提取方法的选择:分别考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等不同提取溶剂,超声、回流等不同提取方式,并进行了提取时间为10min、15min、20min、30min、1h,提取次数为1次、2次的考察,结果表明,以甲醇超声20min 1次即可提取完全,与长时间的提取结果相差很小,因此确定该提取方法。
(5)如今市场上药材良莠不齐,本实验对10批主产地栀子药材中栀子苷含量做了测定,可为中药栀子的质量评价提供一定的科学依据。
参考文献:
[1] 朱振家,钱之玉,陆丽华,等.栀子提取物京尼平苷和西红花苷利胆作用的研究[J].中医药导报,2007,13(11):841.
[2] 赵静,游国钧,李辉,等.不同采收时期栀子中栀子苷的含量测定[J].中医药导报,2007,13(7):102.
[3] 中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.
(责任编辑:姜付平)
Determination of Jasminoidin in Gardenia from Different Areas by HPLC
Duan Qi1,Zhuag Yixiu1,Chen Huashi2
Abstract:Object:To develop a method using HPLC for determination content of Jasminoidin in Gardenia from different areas. Methods:Column: ODS C18(4.6mm×200mm,5μm),mobile phase: acetonitrile–water(15∶85),detected wavelength:238nm. The column temperature was maintained at 25℃. Results:To determination of Jasminoidin in Gardenia from ten areas, the highest was 7.06% and the lowest was 2.89%. Conclusion: The HPLC method is simply and suitable to control quantitative of Gardenia, many facts show a influence on the contents of Jasminoidin in Gardenia from different areas.
Key words:Gardenia;Jasminoidin;HPLC
关键词:栀子;栀子苷;高效液相色谱法
中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)06-0020-02
栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实,为临床常用中药,其性寒味苦,无毒,入心、肝、肺、三焦经,具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效。栀子药理研究表明其具有抗炎、镇静、镇痛、保肝利胆、抗凝血等作用[1],环烯醚萜类化合物和二萜色素类化合物是栀子的主要成分,也是其主要生物活性物质。栀子苷是栀子的主要活性成分,具有抗炎、解热、利胆等作用;水提取物有利胆、降压、抗菌消炎作用;醇提取物有解热、镇静作用。本文建立了HPLC测定栀子中栀子苷含量的方法[2],对7产地的10批栀子中栀子苷含量进行了测定,为中药栀子的质量评价提供科学依据。
1 仪器与试药
美国Agillent 1100高效液相色谱仪,二级阵列检测器,1100色谱工作站。栀子苷(Geniposide)对照品(批号110749-200309)购自中国药品生物制品检定所。乙腈和甲醇均为色谱纯,水为纯化水。药材及中试饮片样品购自不同产地,其中江西泰和、江西秀谷、浙江淳安各2批,江西永丰、湖南浏阳、浙江苍南、福建贯岭各1批。经广东食品药品职业学院中药标本馆鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
大连依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱。流动相:乙腈-水(15∶85),流速为1.0mL/min,柱温25℃,检测波长为238nm,进样量10μL。色谱图见图1。
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2.2 对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品0.74mg,置于20mL容量瓶中,用50%甲醇溶解定容至刻度,制成含有栀子苷0.037mg/mL的储备液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
称取栀子粉末(过2号筛)约0.50g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定质量,超声20min,放凉,补重,用0.45μm微孔滤膜过滤即可进样。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取栀子苷对照品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,在上述色谱条件下进行分析,以栀子苷色谱峰面积(Y)对质量浓度(X)绘制标准曲线。结果表明:栀子苷在0.74~37μg/mL范围内,峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1153X+17.045,r=0.9996。
2.5 精密度试验
精密吸取栀子供试品溶液,在上述色谱条件下连续进样6次,分别测定栀子苷的峰面积,结果RSD为:0.09%。
2.6 重现性试验
取栀子6份各约0.50g,精密称定,按“2.3”项下操作,按上述色谱条件测定各样品的峰面积,计算各对照品的质量分数,栀子苷的RSD为:0.87%。
2.7 稳定性试验
取栀子供试品溶液,分别于0、1、2、4、6、8h在上述色谱条件下进样分析。计算栀子苷的含量,RSD为:0.18%,结果表明供试品在8h内稳定(n=6)。
2.8 加样回收率试验
称取已知量的栀子药材粉末约0.20g,精密称定,分别按相当于药材中栀子苷100%的量加入对照品溶液,按“2.3”项下操作,配制成高、中、低3个水平的加样供试品溶液(各水平平行操作3份),在上述色谱条件下进样分析,计算回收率。栀子苷的平均回收率为100.88%,RSD为1.75%。
2.9 样品测定
按上述方法对各产地栀子进行测定,进样量为10μL,以外标法计算栀子苷的含量。结果见表1。
3 讨论
(1)本文利用DAD检测器获得栀子苷的HPLC图谱;出峰时间适中,峰形对称,分离度符合要求;所用样品含量测定提取方法的方法学考察符合要求;简化了栀子含量测定的繁琐步骤,为探索制订完善栀子原药材、炮制饮片的质量标准提供了依据。检测结果表明:不同产地栀子含量差别明显,福建产栀子苷含量较高,为7.06%;江西永丰产栀子苷较低,为2.89%。2005年版药典规定栀子中栀子苷(C17H24O10)含量不得低于1.8%[3],说明10批药材含量均符合标准要求,但同时表明药材产地的不同环境和土壤条件对药材内在活性成分影响明显。
(2)检测波长的选择:经过Agilent 1100 DAD三维图谱分析,栀子苷在238nm处有最大吸收,因此确定238nm为其检测波长。
(3)流动相的选择:本实验曾经试过乙腈-水、甲醇-水等不同的流动相系统,发现乙腈-水系统可获得较好峰形和适合的极性范围;进而尝试了不同的乙腈-水流动相比例,结果乙腈-水(15∶85)流动相洗脱,获得较好的分离,3个成分的分离度均大于1.5,拖尾因子在0.95～1.05。
(4)提取方法的选择:分别考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等不同提取溶剂,超声、回流等不同提取方式,并进行了提取时间为10min、15min、20min、30min、1h,提取次数为1次、2次的考察,结果表明,以甲醇超声20min 1次即可提取完全,与长时间的提取结果相差很小,因此确定该提取方法。
(5)如今市场上药材良莠不齐,本实验对10批主产地栀子药材中栀子苷含量做了测定,可为中药栀子的质量评价提供一定的科学依据。
参考文献:
[1] 朱振家,钱之玉,陆丽华,等.栀子提取物京尼平苷和西红花苷利胆作用的研究[J].中医药导报,2007,13(11):841.
[2] 赵静,游国钧,李辉,等.不同采收时期栀子中栀子苷的含量测定[J].中医药导报,2007,13(7):102.
[3] 中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.
(责任编辑:姜付平)
Determination of Jasminoidin in Gardenia from Different Areas by HPLC
Duan Qi1,Zhuag Yixiu1,Chen Huashi2
Abstract:Object:To develop a method using HPLC for determination content of Jasminoidin in Gardenia from different areas. Methods:Column: ODS C18(4.6mm×200mm,5μm),mobile phase: acetonitrile–water(15∶85),detected wavelength:238nm. The column temperature was maintained at 25℃. Results:To determination of Jasminoidin in Gardenia from ten areas, the highest was 7.06% and the lowest was 2.89%. Conclusion: The HPLC method is simply and suitable to control quantitative of Gardenia, many facts show a influence on the contents of Jasminoidin in Gardenia from different areas.
Key words:Gardenia;Jasminoidin;HPLC