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[目的]优化大肠杆菌(Escherichia coli)产β-内酰胺酶发酵条件。[方法]选用大肠杆菌为供试菌株获得β-内酰胺酶,通过对该菌种发酵条件进行优化,提高β-内酰胺酶活力。[结果]确定大肠杆菌产β-内酰胺酶的最佳发酵条件为:温度37℃、初始pH 7.8、接种量2.0%、装液量65 ml/250ml发酵瓶。使用最佳发酵条件对大肠杆菌进行培养,最终得到的β-内酰胺酶活力为178.54 U/ml,比优化前提高了33%。[结论]研究可为分离纯化β-内酰胺酶及其降解产物提供一定的参考依据。