【摘 要】
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目的 探讨类固醇受体辅活化子(SRC)-3蛋白在脂多糖(LPS)诱导腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMΦ)炎症反应中的作用.方法 健康SPF级野生型(SRC-3+/+)小鼠、SRC-3基因敲
【机 构】
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成都军区总医院麻醉科,第三军医大学解放军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
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目的 探讨类固醇受体辅活化子(SRC)-3蛋白在脂多糖(LPS)诱导腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMΦ)炎症反应中的作用.方法 健康SPF级野生型(SRC-3+/+)小鼠、SRC-3基因敲除(SRC-3--)小鼠各5只,分别分离和原代培养PMΦ,并分为SRC-3+/+组和SRC-3-/-组.收集并调整细胞浓度为1×106/mL,接种于6孔板,1 mL/孔,给予10 μg/mLLPS刺激,分别在刺激前(N)、刺激后4h和12 h收集培养上清和PMΦ.测定培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和NO的浓度,PMΦ的p65、c-Jun和iNOS的表达及NF-κB和AP-1的DNA结合活性.结果 PMΦ经10 μg/mL LPS刺激4h和12 h后,培养上清液中分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6和NO均显著上升,但在相应时间点SRC-3-/-组显著低于SRC-3+/+组,当LPS刺激4h后,两组PMΦ培养上清液中HMGB1的表达水平与刺激前比较差异无统计学意义(P00.05),刺激12 h后SRC-3+/+组有所升高,而SRC-3-/-组与刺激前比较差异无统计学意义(P＞0.05);LPS刺激4h和12 h后PMΦ的p65和c-Jun表达显著增加,在相应时间点SRC-3-/-组的p65显著高于SRC-3+/+组,而SRC-3-/-组c-Jun却显著低于SRC-3+/+组;LPS刺激4h和12 h后,SRC-3/+组的iNOS表达逐渐增加,而SRC-3-/-组未见变化;LPS刺激4h和12 h后NF-κB和AP-1的DNA结合活性均显著增高,在相应时间点SRC-3-/-组均显著低于SRC-3+/+组.结论 SRC-3可能通过调节iNOS、NF-κB和AP-1的表达及活性来调控PMΦ的炎症反应.
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