【摘 要】
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目的 探讨钠碘转运体（NIS）报告基因的共表达对嵌合型受体T（CAR-T）细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法 慢病毒感染法制备CAR-T细胞（仅表达CD19 CAR的T细胞）、NIS-T细胞（仅表达NIS报告基因的T细胞）和NIS-CAR-T细胞（共表达NIS和CD19 CAR的T细胞），然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组（未转染的T细胞）、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CART组。
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院放射医学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金（81771871）；
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目的 探讨钠碘转运体（NIS）报告基因的共表达对嵌合型受体T（CAR-T）细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法 慢病毒感染法制备CAR-T细胞（仅表达CD19 CAR的T细胞）、NIS-T细胞（仅表达NIS报告基因的T细胞）和NIS-CAR-T细胞（共表达NIS和CD19 CAR的T细胞），然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组（未转染的T细胞）、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CART组。流式细胞术检测各组NIS和CAR转染率。各组细胞常规培养24、48、72 h,CCK-8法检测增殖能力。各组T细胞为效应细胞，Nalm6肿瘤细胞为靶细胞，按效靶比0.5∶1、1∶1、2∶1、4∶1共培养24、48、72 h，乳酸脱氢酶细胞毒性检测法（LDH）检测各组细胞对肿瘤细胞的杀伤率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测共培养上清液中各组细胞因子人干扰素-γ（IFN-γ）和人肿瘤坏死因子-β（TNF-β）释放水平。摄碘实验检测表达NIS蛋白各组细胞的NIS功能。结果 CAR-T细胞、NIS-CAR-T细胞的CAR转染率分别为91.91%、99.41%,NIS-T细胞、NIS-CAR-T细胞的NIS转染率分别为47.83%、50.24%。常规培养24、48、72 h CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞增殖率差异无统计学意义（P>0.05）。0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1效靶比作用24 h时CAR-T细胞杀伤率（%）均高于NIS-CAR-T细胞（P0.05）。CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞均存在IFN-γ和TNF-β释放现象，释放水平均高于对照组（P0.05），但均高于对照组T细胞（P<0.05）。结论 NIS报告基因的共表达不影响CAR-T细胞中CAR转染率，对细胞增殖和杀伤活性无抑制现象。
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