大肠杆菌β-半乳糖苷酶ED和EA的克隆、表达及活性测定

来源 :吉林大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:samantha401
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目的:制备大肠杆菌β-半乳糖苷酶(β—galactosidae)酶供体(ED)和酶受体(EA)片段,获得具有全酶活性的β半乳糖苷酶。方法:以pSV-β-galactosidase control vector为模板设计引物,用PCR方法获得ED和EA片段DNA序列,插入克隆载体pGEM—T-easy中,获得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段分别插入原核表达载体pET20b^+,并转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导表达出ED、EA融合蛋白,以亲和层析纯化蛋白,通过ED与EA蛋白形成
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