【摘 要】
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目的 探讨纳豆激酶（NK）对高糖缺氧导致的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）损伤的保护作用。方法 不同浓度的葡萄糖和氯化钴（CoCl2）诱导培养ARPE-19细胞24 h后，观察细胞形态变化，采用CCK-8法检测ARPE-19细胞活性。Western blot和RT-qPCR检测紧密连接蛋白-1（ZO-1）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、白细胞介素（IL
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（编号：81970824）;国家自然科学基金青年基金（编号：82000865）；
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目的 探讨纳豆激酶（NK）对高糖缺氧导致的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）损伤的保护作用。方法 不同浓度的葡萄糖和氯化钴（CoCl2）诱导培养ARPE-19细胞24 h后，观察细胞形态变化，采用CCK-8法检测ARPE-19细胞活性。Western blot和RT-qPCR检测紧密连接蛋白-1（ZO-1）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18的表达情况，筛选最佳葡萄糖和CoCl2浓度构建体外高糖缺氧的细胞模型。CCK-8法筛选合适的NK浓度，将ARPE-19细胞分为正常糖组(5.5 mmol·L-1葡萄糖，NC组)、高糖+CoCl2组(25.0 mmol·L-1葡萄糖+200μmol·L-1 CoCl2,HG+CoCl2组)和NK处理组(1.0μmol·L-1 NK+25.0 mmol·L-1葡萄糖+200μmol·L-1 CoCl2,NK+HG+CoCl2组),采用Western blot和RT-qPCR检测各组ARPE-19细胞中ZO-1、HIF-1α及VEGFA的蛋白和mRNA表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示，与NC组比较，CoCl2浓度高于200μmol·L-1的干预组中ARPE-19细胞的活性均明显降低（均为P＜0.01）,且细胞形态发生明显改变。Western blot和RT-qPCR检测结果显示，与NC组比较，200μmol·L-1CoCl2的干预组ARPE-19细胞中HIF-1α和VEGFA的蛋白和mRNA与IL-1β和IL-18的mRNA的表达水平均明显增加（均为P＜0.01）,而ZO-1蛋白的表达水平均明显降低（均为P＜0.05）。CCK-8法检测结果显示，当NK浓度高于1.0μmol·L-1时，ARPE-19细胞的活性较NC组均明显下降（均为P＜0.01）。与HG+CoCl2组比较，NK+HG+CoCl2组ARPE-19细胞中HIF-1α、VEGFA蛋白和mRNA的表达水平均显著降低（均为P＜0.001）,而ZO-1蛋白的表达水平明显上升（P＜0.05）。结论 NK可以降低高糖缺氧损伤的ARPE-19细胞中HIF-1α及VEGFA的蛋白和mRNA表达水平，对高糖缺氧引起的细胞损伤具有保护作用。
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