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摘 要：为探明日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长及碳氮代谢的影响，以K326为材料，用不同浓度（原液、1/10原液、1/50原液和1/100原液）日本外担菌培养液喷施烤烟幼苗，分析其对烤烟幼苗生长及叶绿体色素含量、根系活力和碳氮代谢关键酶活性的影响。结果表明，处理后3 d，1/50原液处理的幼苗根系活力最高，较对照显著增加276 μg/（g·h）;原液处理的幼苗叶绿体色素含量显著高于对照，叶绿素a、b和类胡萝卜素含量分别增加0.324、0.104和0.060 mg/g。处理后7 d，1/100原液处理的幼苗硝酸还原酶（NR）、谷氨酰胺合成酶（GS）、可溶性淀粉合成酶（SSS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）和蔗糖转化酶（INV）活性最高，较对照显著增加0.36、0.44、5.16、58.02和362.60 U/g;处理后11 d，1/100原液处理的幼苗叶长、叶宽、叶面积和株高显著高于对照，分别增加3.11 cm、1.03 cm、25.39 cm2和5.13 cm。綜合而言，1/100原液浓度促进烤烟幼苗生长的效果最显著，1/50原液次之。
关键词：日本外担菌;烤烟幼苗;生长;根系活力;碳氮代谢
Abstract： To study the effects of Exobasidium japonicum liquid culture on growth and key enzymes of carbon and nitrogen metabolism of flue-cured tobacco seedlings， with K326 as the test material， different concentrations （original solution， 1/10 original solution， 1/50 original solution and 1/100 original solution） of the liquid culture were used to spray the flue-cured tobacco seedlings， the effects on growth， chlorophyll content， root activity and key enzyme activities of carbon and nitrogen metabolism of flue-cured tobacco seedlings were analyzed. The results showed that on the third day after treatment， the root activity of seedlings treated with 1/50 original solution was the highest， which was 276 μg/（g·h） higher than that of CK. Chlorophyll a content， chlorophyll b content and carotenoid content were increased by 0.324， 0.104 and 0.060 mg/g respectively. On the 7th day after treatment， the activities of NR， GS， SSS， SPS and INV of seedlings treated with 1/100 original solution were the highest， which were significantly increased by 0.36， 0.44， 5.16， 58.02 and 362.60 U/g compared with the control. On the 11th day after treatment， leaf length， leaf width， leaf area and plant height of seedlings treated by 1/100 solution were significantly higher than those treated by CK， increased by 3.11 cm， 1.03 cm， 25.39 cm2 and 5.13 cm， respectively. Different concentrations of E. japonicum liquid culture had different effects on tobacco seedlings. In summary， 1/100 original solution concentration promoted the growth of flue-cured tobacco seedlings with the most significant effect， followed by 1/50 original solution.
Keywords： Exobasidium japonicum; tobacco seedlings; growth; root activity; C/N metabolism
外担菌属（Exobasidium）为担子菌门（Basidiomycota）真菌，是重要的植物病原菌，主要寄生杜鹃花科（Ericaceae）、茶科（Theaceae）和樟科（Lauraceae）等木本植物，引起寄主植物产生肿胀、斑点、从枝和菌瘿等症状[1]。阙生全[2]研究发现，油茶受到细丽外担菌（E. gracile）侵染后，叶片中生长素（IAA）和赤霉素（GA3）含量出现先升后降的变化趋势，而脱落酸（ABA）呈先降后升的变化，还发现细丽外担菌培养液中含有IAA和ABA。刘爱英等[3]和郭春秋等[4]研究表明，细丽外担菌（E. gracile）培养液能刺激非寄主植物如萝卜、水稻种子萌发和根生长。赵晨心等[5]检测到引发茶饼病的坏损外担菌（E. vexans）培养液中含有GA3、3-吲哚丁酸（IBA）和6-苄氨基嘌呤（6-BA）等多种植物生长调节物质。李春黎等[6]用坏损外担菌（E. vexans）培养液处理烟苗后对其生长有明显促进作用。因此，外担菌属真菌可产生植物生长调节物质，对非寄主植物生长有一定调控作用。 烤烟壮苗培育直接影响烟株后期的长势及产质量[7]。前人研究发现，适宜浓度的GA3能有效增加叶片SPAD值，增强烟苗根系活力，促进烟苗生长[8]，褪黑素（MT）、2， 4-表油菜素内酯（EBR）单独和复配处理均能显著促进干旱胁迫下烤烟幼苗的生长，增强根系活力，提高叶片SPAD值[9];碳氮代谢是烤烟的基础代谢，陈富彩等[10]发现打顶后喷施GA3和IAA能增强叶片的碳氮代谢，说明植物生长物质能对烤烟生长及碳氮代谢产生影响。本课题组从贵州省贵阳市南明区凤凰山采集锦绣杜鹃叶肿病标本，经分离鉴定病原菌为日本外担菌（E. japonicum）。目前还未见日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长调控的相关研究，为此本文以烤烟品种K326为材料，探究不同浓度日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长及碳氮代谢关键酶活性的影响，以期为培育烤烟壮苗提供一定依据。
1 材料与方法
1.1 材料
供试烤烟品种为K326，日本外擔菌菌株由贵州省烟草品质研究重点实验室提供，马铃薯葡萄糖（PD）培养液制备参照文献[5]：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，蒸馏水1000 mL，121 ℃高温灭菌20 min备用。
1.2 方法
1.2.1 试验设计 试验于2020年8月4日在贵州省烟草品质研究重点实验室盆栽基地进行。设5个处理：喷施日本外担菌培养液原液、1/10原液、1/50原液和1/100原液，以喷施PD培养液为对照。每处理重复3次，每重复50盆。选用长53 mm、宽35 mm、高58 mm规格的育苗盆育苗，每盆1株。待烤烟幼苗长至5叶1心时，对叶面喷施不同浓度日本外担菌培养液（喷液量以叶片正反面均匀喷施至形成细雾状小液珠欲滴为准），每处理选取15株烟苗定株挂牌。处理后0、1、3、7和11 d取地上部用液氮处理后?80 ℃超低温冰箱保存待测。
1.2.2 农艺性状的测定 测量烟苗最大叶（主茎从上往下第3片完全展开的叶片）长、宽，茎围和株高，计算叶面积，统计有效叶片数。
1.2.3 生理代谢指标的测定 按文献[11]方法测定叶绿体色素含量，根系活力测定用TTC法[12]，谷氨酰胺合成酶（GS）、硝酸还原酶（NR）、可溶性淀粉酶（SSS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）和蔗糖转化酶（INV）等酶活性均采用深圳子科生物有限公司ELISA检测试剂盒进行测定。
1.3 数据分析
所有数据均采用Excel 2017整理，采用SPSS 21软件进行Duncan分析。
2 结 果
2.1 对烤烟幼苗生长的影响
由表1知，处理后0、1和3 d，不同浓度培养液对叶片生长无显著影响。处理后7 d，原液处理叶片长度显著高于对照;处理后11 d，原液处理叶片长度显著高于对照，较对照增加1.42 cm，1/50原液叶长和株高显著高于对照，分别增加1.32和3.00 cm，1/100原液叶长、叶宽、叶面积和株高显著高于对照，分别增加3.11 cm、1.03 cm、25.39 cm2和5.13 cm。说明不同浓度日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长有明显促进作用，1/100原液效果最佳。
2.2 对烤烟幼苗生理代谢的影响
2.2.1 对叶片叶绿体色素含量的影响 由表2知：处理后1 d，原液和1/10原液处理的烟苗叶绿体色素含量显著高于对照，其叶绿素a含量较对照显著提高0.265和0.266 mg/g，叶绿素b含量显著提高0.117和0.093 mg/g，类胡萝卜素含量提高0.065和0.050 mg/g;处理后3 d，原液、1/10原液和1/100原液处理的烟苗叶绿体色素含量均显著高于对照，叶绿素a含量提高0.324、0.285和0.190 mg/g，叶绿素b含量提高0.104、0.174和0.257 mg/g，类胡萝卜素含量提高0.060、0.050和0.033 mg/g，1/50原液处理后烟苗的叶绿素a 含量与类胡萝卜素含量显著高于对照，其含量分别显著提高0.203和0.036 mg/g;处理后7 d，1/10原液处理的烟苗叶绿素a含量显著高于对照，增加0.123 mg/g;处理后11 d，1/50原液处理的烟苗叶绿体色素含量显著高于对照，叶绿素a、b和类胡萝卜素分别增加0.341、0.128和0.040 mg/g。说明不同浓度的日本外担菌培养液处理烤烟幼苗后，叶片的叶绿体色素含量显著增加，原液的效果最佳。
2.2.2 对根系活力的影响 由图1知，处理后1 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力均显著高于对照，较对照依次增加183、193和108 μg/（g·h）;处理后3 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力显著高于对照，分别增加109、276和238 μg/（g·h）;处理后7 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力显著高于对照，分别增加135、214和180 μg/（g·h）;处理后11 d，各处理的烟苗根系活力较对照显著增加144、63、206和129 μg/（g·h）。说明，原液、1/50原液和1/100原液的日本外担菌培养液对烤烟幼苗根系活力有明显促进作用，1/50原液处理后的烟苗根系活力最高，且显著高于对照和其他处理。
2.3 对烤烟幼苗叶片碳氮代谢关键酶活性的影响
2.3.1 对氮代谢酶活性的影响 由图2知，不同浓度日本外担菌培养液处理对烤烟幼苗叶片的GS和NR活性影响呈现先增高后降低趋势。处理后7 d，各处理叶片的GS和NR活性达到峰值，且均显著高于对照，原液、1/10原液、1/50原液和1/100原液处理的叶片GS活性较对照分别增加0.29、0.36、0.40和0.44 U/g;NR活性较对照分别增加0.12、0.20、0.23和0.42 U/g。说明，日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗氮代谢关键酶活性有积极作用，且随着培养液浓度降低，对酶活性促进作用更加显著。 2.3.2 对碳代谢酶活性的影响 从图3可知，日本外担菌培养液处理后1、3、7和11 d，叶片的SSS、SPS和INV活性均显著高于对照，各处理3种酶活性表现为原液<1/10原液<1/50原液<1/100原液。处理后1～7 d，3种酶活性增长显著，7 d达到高峰，4个处理的叶片SSS酶活性显著高于对照，分别增加3.21、4.11、4.72和5.16 U/g;1/50原液和1/100原
液处理的叶片SPS酶活性显著高于处理原液和1/10原液，较对照分别增加52.50和58.02 U/g;1/100原液处理的叶片INV活性显著高于其他3个处理，较对照增加362.60 U/g。说明，日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗碳代谢关键酶活性有积极作用，且随着培养液浓度降低，对酶活性促进作用更加显著。
3 讨 论
3.1 日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长的影响
外源生长素、赤霉素和脱落酸等植物生长调节物质可对烤烟生长发育起调控作用[13-15]。本课题组研究发现日本外担菌培养液中含有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、脱落酸（ABA）、激动素（KT）、茉莉酸（JA）和亚精胺（Spermidine）等7种植物生长调节物质。日本外担菌培养液1/100原液处理后11 d，对烤烟幼苗叶长、叶宽和叶面积有明显促进作用，还能促进幼苗长高和长叶，说明1/100原液对烤烟幼苗生长有明显促进作用。前人研究发现喷施赤霉素能够改善叶片发育，50 mg/kg的GA3能够显著提高烟叶的叶长、叶宽、单叶重和抗张性[14];打顶后喷施30 mg/L的IAA能够显著提高叶长、叶宽、叶面积[10];李春黎等[6]研究发现坏损外担菌培养液1/50原液对烤烟幼苗生长有明显促进效果，与本研究结果相似。
3.2 日本外担菌培养液对烤烟幼苗叶绿素含量和根系活力的影响
根系活力不仅反映根系吸收养分与代谢的能力，同时还影响地上部的生长发育及生理代谢[16-17]。叶绿素是植物光合作用的主要色素，其含量直接影响作物的光合能力[18]。张会灵等[19]发现适宜浓度的赤霉素对烤烟和萝卜幼苗的根系活力和叶绿素含量有明显促进作用，冯长春等[16]研究结果表明外源生长素对烟苗根系活力和叶绿素含量有一定程度提升;李冬等[9]发现褪黑素（MT）、2，4-表油菜素内酯（EBR）单独和复配处理均能显著促进干旱胁迫下烤烟幼苗的生长，增强根系活力和叶片SPAD值。本试验发现不同浓度日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗叶绿体色素含量和根系活力有明显促进作用，处理后3 d，原液、1/10原液和1/100原液能显著提高烤烟幼苗叶绿素a、b和类胡萝卜素含量，其中原液的效果最好;1/50原液处理的烤烟幼苗根系活力最强，较对照增加276.24 ?g/（g·h）。李春黎等[6]用1/50原液的坏损外担菌培养液处理后的烤烟幼苗叶绿素a和类胡萝卜素含量最高，与本研究结果有所不同，原因可能是2种不同外担菌属真菌，其培养液中的植物生长调节物质种类不同所致。
3.3 日本外担菌培养液对烤烟幼苗碳氮代谢关键酶的影响
碳代谢是烟草植株生长和品质形成的基础代谢之一，对烟草植株中重要化合物的组分、含量和比例具有重要影响[20]。蔗糖磷酸合成酶（SPS）、蔗糖合成酶（SS）和蔗糖转化酶（INV）等是碳代谢关键酶，其活性可作为衡量碳代谢强度的重要指标[21]。本研究发现不同浓度日本外担菌培养液均能显著提高烤烟幼苗SPS和INV活性，处理后7 d，1/100原液处理的烤烟幼苗酶活性最高，显著高于对照和其他3个处理，与罗凯等[22]研究发现外源6-苄基腺嘌呤（6-BA）处理能提高各时期大豆叶片 SS、SPS、INV酶活性相似。氮代谢在烟草生长过程中起着重要作用，包括有机物的合成和转化[23]，其中硝酸还原酶（NR）是植物氮代谢的关键酶和限速酶，谷氨酰胺合成酶（GS）能够催化谷氨酰胺的合成，两种酶活性在一定程度上是氮代谢强弱的直接反映[24-25]。本研究发现，日本外担菌培养液处理后能显著提高烤烟幼苗NR和GS活性，且随着培养液浓度的降低对其活性促进作用更加显著。这与多人研究结果相似：打顶后喷施生长素对烤烟叶片中NR、GS活性有明显促进作用[26-27]，涂抹NAA能显著增加烤烟NR活性，增强烤烟氮代谢[28]。说明日本外担菌培养液能通过提高烤烟幼苗碳氮代谢关键酶活性，进一步影响烟株碳氮代谢水平，对烤烟幼苗生长产生影响。
4 结 论
综上所述，不同浓度日本外担菌培养液处理烤烟幼苗后，对其生长和叶绿体色素含量、根系活力有明顯促进作用，表现为原液处理后烤烟幼苗叶绿体色素含量显著高于其他处理，1/50原液对烤烟幼苗根系活力促进作用最显著，1/100原液处理后的烤烟幼苗叶长、叶宽、叶面积和株高均显著高于对照;不同浓度培养液处理后均能显著提高烤烟幼苗NR、GS、SSS、SPS和INV等5种碳氮代谢关键酶活性，且随着培养液浓度的降低烤烟幼苗的酶活性更高。日本外担菌培养液影响烤烟幼苗生长及碳氮代谢是一个复杂的调控机制，还有待进一步在分子、细胞水平上进行深入研究。
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关键词：日本外担菌;烤烟幼苗;生长;根系活力;碳氮代谢
Abstract： To study the effects of Exobasidium japonicum liquid culture on growth and key enzymes of carbon and nitrogen metabolism of flue-cured tobacco seedlings， with K326 as the test material， different concentrations （original solution， 1/10 original solution， 1/50 original solution and 1/100 original solution） of the liquid culture were used to spray the flue-cured tobacco seedlings， the effects on growth， chlorophyll content， root activity and key enzyme activities of carbon and nitrogen metabolism of flue-cured tobacco seedlings were analyzed. The results showed that on the third day after treatment， the root activity of seedlings treated with 1/50 original solution was the highest， which was 276 μg/（g·h） higher than that of CK. Chlorophyll a content， chlorophyll b content and carotenoid content were increased by 0.324， 0.104 and 0.060 mg/g respectively. On the 7th day after treatment， the activities of NR， GS， SSS， SPS and INV of seedlings treated with 1/100 original solution were the highest， which were significantly increased by 0.36， 0.44， 5.16， 58.02 and 362.60 U/g compared with the control. On the 11th day after treatment， leaf length， leaf width， leaf area and plant height of seedlings treated by 1/100 solution were significantly higher than those treated by CK， increased by 3.11 cm， 1.03 cm， 25.39 cm2 and 5.13 cm， respectively. Different concentrations of E. japonicum liquid culture had different effects on tobacco seedlings. In summary， 1/100 original solution concentration promoted the growth of flue-cured tobacco seedlings with the most significant effect， followed by 1/50 original solution.
Keywords： Exobasidium japonicum; tobacco seedlings; growth; root activity; C/N metabolism
外担菌属（Exobasidium）为担子菌门（Basidiomycota）真菌，是重要的植物病原菌，主要寄生杜鹃花科（Ericaceae）、茶科（Theaceae）和樟科（Lauraceae）等木本植物，引起寄主植物产生肿胀、斑点、从枝和菌瘿等症状[1]。阙生全[2]研究发现，油茶受到细丽外担菌（E. gracile）侵染后，叶片中生长素（IAA）和赤霉素（GA3）含量出现先升后降的变化趋势，而脱落酸（ABA）呈先降后升的变化，还发现细丽外担菌培养液中含有IAA和ABA。刘爱英等[3]和郭春秋等[4]研究表明，细丽外担菌（E. gracile）培养液能刺激非寄主植物如萝卜、水稻种子萌发和根生长。赵晨心等[5]检测到引发茶饼病的坏损外担菌（E. vexans）培养液中含有GA3、3-吲哚丁酸（IBA）和6-苄氨基嘌呤（6-BA）等多种植物生长调节物质。李春黎等[6]用坏损外担菌（E. vexans）培养液处理烟苗后对其生长有明显促进作用。因此，外担菌属真菌可产生植物生长调节物质，对非寄主植物生长有一定调控作用。 烤烟壮苗培育直接影响烟株后期的长势及产质量[7]。前人研究发现，适宜浓度的GA3能有效增加叶片SPAD值，增强烟苗根系活力，促进烟苗生长[8]，褪黑素（MT）、2， 4-表油菜素内酯（EBR）单独和复配处理均能显著促进干旱胁迫下烤烟幼苗的生长，增强根系活力，提高叶片SPAD值[9];碳氮代谢是烤烟的基础代谢，陈富彩等[10]发现打顶后喷施GA3和IAA能增强叶片的碳氮代谢，说明植物生长物质能对烤烟生长及碳氮代谢产生影响。本课题组从贵州省贵阳市南明区凤凰山采集锦绣杜鹃叶肿病标本，经分离鉴定病原菌为日本外担菌（E. japonicum）。目前还未见日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长调控的相关研究，为此本文以烤烟品种K326为材料，探究不同浓度日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长及碳氮代谢关键酶活性的影响，以期为培育烤烟壮苗提供一定依据。
1 材料与方法
1.1 材料
供试烤烟品种为K326，日本外擔菌菌株由贵州省烟草品质研究重点实验室提供，马铃薯葡萄糖（PD）培养液制备参照文献[5]：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，蒸馏水1000 mL，121 ℃高温灭菌20 min备用。
1.2 方法
1.2.1 试验设计 试验于2020年8月4日在贵州省烟草品质研究重点实验室盆栽基地进行。设5个处理：喷施日本外担菌培养液原液、1/10原液、1/50原液和1/100原液，以喷施PD培养液为对照。每处理重复3次，每重复50盆。选用长53 mm、宽35 mm、高58 mm规格的育苗盆育苗，每盆1株。待烤烟幼苗长至5叶1心时，对叶面喷施不同浓度日本外担菌培养液（喷液量以叶片正反面均匀喷施至形成细雾状小液珠欲滴为准），每处理选取15株烟苗定株挂牌。处理后0、1、3、7和11 d取地上部用液氮处理后?80 ℃超低温冰箱保存待测。
1.2.2 农艺性状的测定 测量烟苗最大叶（主茎从上往下第3片完全展开的叶片）长、宽，茎围和株高，计算叶面积，统计有效叶片数。
1.2.3 生理代谢指标的测定 按文献[11]方法测定叶绿体色素含量，根系活力测定用TTC法[12]，谷氨酰胺合成酶（GS）、硝酸还原酶（NR）、可溶性淀粉酶（SSS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）和蔗糖转化酶（INV）等酶活性均采用深圳子科生物有限公司ELISA检测试剂盒进行测定。
1.3 数据分析
所有数据均采用Excel 2017整理，采用SPSS 21软件进行Duncan分析。
2 结 果
2.1 对烤烟幼苗生长的影响
由表1知，处理后0、1和3 d，不同浓度培养液对叶片生长无显著影响。处理后7 d，原液处理叶片长度显著高于对照;处理后11 d，原液处理叶片长度显著高于对照，较对照增加1.42 cm，1/50原液叶长和株高显著高于对照，分别增加1.32和3.00 cm，1/100原液叶长、叶宽、叶面积和株高显著高于对照，分别增加3.11 cm、1.03 cm、25.39 cm2和5.13 cm。说明不同浓度日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长有明显促进作用，1/100原液效果最佳。
2.2 对烤烟幼苗生理代谢的影响
2.2.1 对叶片叶绿体色素含量的影响 由表2知：处理后1 d，原液和1/10原液处理的烟苗叶绿体色素含量显著高于对照，其叶绿素a含量较对照显著提高0.265和0.266 mg/g，叶绿素b含量显著提高0.117和0.093 mg/g，类胡萝卜素含量提高0.065和0.050 mg/g;处理后3 d，原液、1/10原液和1/100原液处理的烟苗叶绿体色素含量均显著高于对照，叶绿素a含量提高0.324、0.285和0.190 mg/g，叶绿素b含量提高0.104、0.174和0.257 mg/g，类胡萝卜素含量提高0.060、0.050和0.033 mg/g，1/50原液处理后烟苗的叶绿素a 含量与类胡萝卜素含量显著高于对照，其含量分别显著提高0.203和0.036 mg/g;处理后7 d，1/10原液处理的烟苗叶绿素a含量显著高于对照，增加0.123 mg/g;处理后11 d，1/50原液处理的烟苗叶绿体色素含量显著高于对照，叶绿素a、b和类胡萝卜素分别增加0.341、0.128和0.040 mg/g。说明不同浓度的日本外担菌培养液处理烤烟幼苗后，叶片的叶绿体色素含量显著增加，原液的效果最佳。
2.2.2 对根系活力的影响 由图1知，处理后1 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力均显著高于对照，较对照依次增加183、193和108 μg/（g·h）;处理后3 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力显著高于对照，分别增加109、276和238 μg/（g·h）;处理后7 d，原液、1/50原液和1/100原液处理的烟苗根系活力显著高于对照，分别增加135、214和180 μg/（g·h）;处理后11 d，各处理的烟苗根系活力较对照显著增加144、63、206和129 μg/（g·h）。说明，原液、1/50原液和1/100原液的日本外担菌培养液对烤烟幼苗根系活力有明显促进作用，1/50原液处理后的烟苗根系活力最高，且显著高于对照和其他处理。
2.3 对烤烟幼苗叶片碳氮代谢关键酶活性的影响
2.3.1 对氮代谢酶活性的影响 由图2知，不同浓度日本外担菌培养液处理对烤烟幼苗叶片的GS和NR活性影响呈现先增高后降低趋势。处理后7 d，各处理叶片的GS和NR活性达到峰值，且均显著高于对照，原液、1/10原液、1/50原液和1/100原液处理的叶片GS活性较对照分别增加0.29、0.36、0.40和0.44 U/g;NR活性较对照分别增加0.12、0.20、0.23和0.42 U/g。说明，日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗氮代谢关键酶活性有积极作用，且随着培养液浓度降低，对酶活性促进作用更加显著。 2.3.2 对碳代谢酶活性的影响 从图3可知，日本外担菌培养液处理后1、3、7和11 d，叶片的SSS、SPS和INV活性均显著高于对照，各处理3种酶活性表现为原液<1/10原液<1/50原液<1/100原液。处理后1～7 d，3种酶活性增长显著，7 d达到高峰，4个处理的叶片SSS酶活性显著高于对照，分别增加3.21、4.11、4.72和5.16 U/g;1/50原液和1/100原
液处理的叶片SPS酶活性显著高于处理原液和1/10原液，较对照分别增加52.50和58.02 U/g;1/100原液处理的叶片INV活性显著高于其他3个处理，较对照增加362.60 U/g。说明，日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗碳代谢关键酶活性有积极作用，且随着培养液浓度降低，对酶活性促进作用更加显著。
3 讨 论
3.1 日本外担菌培养液对烤烟幼苗生长的影响
外源生长素、赤霉素和脱落酸等植物生长调节物质可对烤烟生长发育起调控作用[13-15]。本课题组研究发现日本外担菌培养液中含有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、脱落酸（ABA）、激动素（KT）、茉莉酸（JA）和亚精胺（Spermidine）等7种植物生长调节物质。日本外担菌培养液1/100原液处理后11 d，对烤烟幼苗叶长、叶宽和叶面积有明显促进作用，还能促进幼苗长高和长叶，说明1/100原液对烤烟幼苗生长有明显促进作用。前人研究发现喷施赤霉素能够改善叶片发育，50 mg/kg的GA3能够显著提高烟叶的叶长、叶宽、单叶重和抗张性[14];打顶后喷施30 mg/L的IAA能够显著提高叶长、叶宽、叶面积[10];李春黎等[6]研究发现坏损外担菌培养液1/50原液对烤烟幼苗生长有明显促进效果，与本研究结果相似。
3.2 日本外担菌培养液对烤烟幼苗叶绿素含量和根系活力的影响
根系活力不仅反映根系吸收养分与代谢的能力，同时还影响地上部的生长发育及生理代谢[16-17]。叶绿素是植物光合作用的主要色素，其含量直接影响作物的光合能力[18]。张会灵等[19]发现适宜浓度的赤霉素对烤烟和萝卜幼苗的根系活力和叶绿素含量有明显促进作用，冯长春等[16]研究结果表明外源生长素对烟苗根系活力和叶绿素含量有一定程度提升;李冬等[9]发现褪黑素（MT）、2，4-表油菜素内酯（EBR）单独和复配处理均能显著促进干旱胁迫下烤烟幼苗的生长，增强根系活力和叶片SPAD值。本试验发现不同浓度日本外担菌培养液处理后对烤烟幼苗叶绿体色素含量和根系活力有明显促进作用，处理后3 d，原液、1/10原液和1/100原液能显著提高烤烟幼苗叶绿素a、b和类胡萝卜素含量，其中原液的效果最好;1/50原液处理的烤烟幼苗根系活力最强，较对照增加276.24 ?g/（g·h）。李春黎等[6]用1/50原液的坏损外担菌培养液处理后的烤烟幼苗叶绿素a和类胡萝卜素含量最高，与本研究结果有所不同，原因可能是2种不同外担菌属真菌，其培养液中的植物生长调节物质种类不同所致。
3.3 日本外担菌培养液对烤烟幼苗碳氮代谢关键酶的影响
碳代谢是烟草植株生长和品质形成的基础代谢之一，对烟草植株中重要化合物的组分、含量和比例具有重要影响[20]。蔗糖磷酸合成酶（SPS）、蔗糖合成酶（SS）和蔗糖转化酶（INV）等是碳代谢关键酶，其活性可作为衡量碳代谢强度的重要指标[21]。本研究发现不同浓度日本外担菌培养液均能显著提高烤烟幼苗SPS和INV活性，处理后7 d，1/100原液处理的烤烟幼苗酶活性最高，显著高于对照和其他3个处理，与罗凯等[22]研究发现外源6-苄基腺嘌呤（6-BA）处理能提高各时期大豆叶片 SS、SPS、INV酶活性相似。氮代谢在烟草生长过程中起着重要作用，包括有机物的合成和转化[23]，其中硝酸还原酶（NR）是植物氮代谢的关键酶和限速酶，谷氨酰胺合成酶（GS）能够催化谷氨酰胺的合成，两种酶活性在一定程度上是氮代谢强弱的直接反映[24-25]。本研究发现，日本外担菌培养液处理后能显著提高烤烟幼苗NR和GS活性，且随着培养液浓度的降低对其活性促进作用更加显著。这与多人研究结果相似：打顶后喷施生长素对烤烟叶片中NR、GS活性有明显促进作用[26-27]，涂抹NAA能显著增加烤烟NR活性，增强烤烟氮代谢[28]。说明日本外担菌培养液能通过提高烤烟幼苗碳氮代谢关键酶活性，进一步影响烟株碳氮代谢水平，对烤烟幼苗生长产生影响。
4 结 论
综上所述，不同浓度日本外担菌培养液处理烤烟幼苗后，对其生长和叶绿体色素含量、根系活力有明顯促进作用，表现为原液处理后烤烟幼苗叶绿体色素含量显著高于其他处理，1/50原液对烤烟幼苗根系活力促进作用最显著，1/100原液处理后的烤烟幼苗叶长、叶宽、叶面积和株高均显著高于对照;不同浓度培养液处理后均能显著提高烤烟幼苗NR、GS、SSS、SPS和INV等5种碳氮代谢关键酶活性，且随着培养液浓度的降低烤烟幼苗的酶活性更高。日本外担菌培养液影响烤烟幼苗生长及碳氮代谢是一个复杂的调控机制，还有待进一步在分子、细胞水平上进行深入研究。
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