【摘 要】
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为制备土霉素（Oxytetracycline,OTC）完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其
【机 构】
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河南省农业科学院动物免疫学重点实验室; 河南科技大学食品与生物工程学院; 河南农业大学;
【基金项目】
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国家“十二五”科技支撑计划课题（编号：2014BAD13B05）;国家重点研发计划（编号：2018YFC1602903）;国家自然科学基金（编号：31702218）;河南省自然科学基金（编号：182300410038）;河南省科技攻关项目（编号：182102110445,182102310230）;河南省高等学校重点科研项目（编号：18B550001）;河南省动物免疫学重点实验室开放课题（编号
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为制备土霉素（Oxytetracycline,OTC）完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清（pAb）并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法。结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC50)为32.92ng/mL,检测限（LOD）为1.3ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%～87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率<0.4%。该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法。
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