【摘 要】
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目的构建鼠源抗曲霉菌单链抗体(sc Fv)噬菌体展示文库并进行初步鉴定,为制备用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性抗体提供新的方法。方法利用噬菌体展示技术构建鼠源抗烟曲
【机 构】
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沈阳医学院基础医学院,辽宁省环境污染与微生态重点实验室,
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目的构建鼠源抗曲霉菌单链抗体(sc Fv)噬菌体展示文库并进行初步鉴定,为制备用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性抗体提供新的方法。方法利用噬菌体展示技术构建鼠源抗烟曲霉半乳甘露聚糖(GM)Sc Fv库,经过4轮"吸附-洗脱-扩增"淘选富集,随机挑选克隆进行可变区基因测序确定文库多样性,并用phageELISA筛选烟曲霉特异性结合的克隆。结果构建的sc Fv噬菌体表达文库,库容量约为1.8×107;经4轮富集筛选,洗脱的表达sc Fv噬菌体滴度渐增;随机挑选出4轮筛选后的20个克隆,其可变区基因序列不同;随机挑选出4轮筛选后的90个克隆,其中6个克隆与烟曲霉GM特异性结合,而与对照的白假丝酵母菌无结合。结论构建并初步鉴定了抗曲霉菌单链抗体库,库容量大,VH和VL区具备多样性;筛选的sc Fv与曲霉菌GM特异性结合,提供了快速制备、筛选GM高特异性抗体分子的新方法。
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