大豆GmMYB46基因的克隆、定位及表达分析

来源 :南京农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zfz508
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[目的]本文旨在研究MYB类转录因子基因GmMYB46的结构特征和定位并阐述其对不同胁迫的响应,为明确其在逆境胁迫下的作用奠定基础。[方法]从大豆品种‘晋豆21’中克隆出GmMYB46的CDS序列,采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行分析,并利用PlantCARE软件分析GmMYB46基因启动子元件。通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统对GmMYB46蛋白质全长及不同结构域M1(aa1~123)、M2(aa124~334)进行亚细胞定位分析。采用实时荧光定量PCR检测GmMYB46在不同逆境处理下的表达情况。[结果]GmMYB46 CDS序列全长为1 005 bp,编码334个氨基酸,蛋白质相对分子质量为82.53×103,氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。进化树分析表明该基因编码的蛋白与野生大豆GsMYB46亲缘关系最近。GmMYB46包含MBS、ABRE、GARE、TCA、LTR等逆境胁迫应答元件。亚细胞定位结果显示,pBIN-GmMYB46-GFP及pBIN-GmMYB46M1-GFP融合蛋白在细胞核中表达,pBIN-GmMYB46M2-GFP绿色荧光遍布整个细胞。实时荧光定量PCR分析表明,在干旱、盐(200 mmol·L-1 NaCl)、低温(4℃)、ABA(200μmol·L-1)、SA(500μmol·L-1)、GA(100μmol·L-1)处理下均能诱导GmMYB46基因在大豆根、茎、叶中的上调表达。【结论】GmMYB46基因的保守结构域对亚细胞定位起决定性作用,该基因可能参与大豆对非生物胁迫的响应。
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