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摘要：目的 建立口服左旋多巴甲酯胶囊后血浆及尿液中左旋多巴浓度测定方法，并对左旋多巴甲酯胶囊进行人体药代动力学研究。方法 血样：采用HPLC—荧光法测定，色谱柱 Thermo C18（4.6mm×250mm，5m），流动相甲醇 – 水相（13：87，v/v），流速：1.0ml?min-1，荧光检测，激发波长278nm，发射波长325nm。尿样：采用HPLC-荧光法测定，色谱柱Alltima C18（4.6mm×250mm，5m），流动相乙腈 – 水相（2.2：97.8，v/v），流速：1.0ml?min-1，荧光检测，激发波长278nm，发射波长325nm。结果 受试者单次口服250mg左旋多巴甲酯胶囊后左旋多巴的药动学参数分别为，t1/2α：0.559h；t1/2β：1.409h；Cmax：1032.463mg/l；Tmax：0.333h；口服500mg左旋多巴甲酯胶囊，t1/2α：0.335h；t1/2β：1.404h；Cmax：2531.118mg/l；Tmax：0.333h。结论 此方法的灵敏度与准确度较高，操作简便，预试时间点设计合理，药动学参数跟预期结果相符，可为左旋多巴甲酯临床药代动力学研究（正式试验）提供参考。
关键词：左旋多巴甲酯；高效液相色谱法；药代动力学
1 试验目的
采用低、高二种单剂量和多剂量的试验设计，对左旋多巴甲酯胶囊进行人体药代动力学研究，估算相应的药代动力学参数，为II期临床试验的剂量提供药代动力学参数依据。
2 血浆中药物的HPLC-荧光法测定方法[1]
色譜条件 流动相：甲醇 – 水相（13：87，v/v），其中水相含EDTA0.08mmol/L，KH2PO4 50mmol/L，庚烷磺酸钠2mmol/L，流速：1.0ml?min-1。色谱柱：Thermo C18（4.6mm×250mm，5m），激发波长为278nm，发射波长为325nm。
3 血浆样品的处理
精密吸取血浆样品300μl于塑料离心管中，加入20%高氯酸150?l，涡旋混匀，15000 rpm低温离心8 min，取上清液20?l进样分析。
4尿样中药物的HPLC-荧光法测定方法[2]
色谱条件 流动相：乙腈 – 水相（2.2：97.8，v/v），其中水相含EDTA0.08mmol/L，KH2PO450mmol/L，庚烷磺酸钠2mmol/L，流速：1.0ml?min-1，色谱柱Alltima C18（4.6mm×250mm，5m），激发波长为278nm，发射波长为325nm。
5尿样的处理
精密吸取尿样300μl于塑料离心管中，加入20%高氯酸100?l，涡旋混匀，15000 rpm低温离心8 min，取上清液20?l进样分析。
6根据《化学药物制人体药代动力学试验指导原则》的要求，给药剂量一般应与临床用药剂量基本一致[3]，故试验中药物临床给药途径为口服，单次给药剂量分低、高两个剂量组，分别为250mg、500mg。
7数据处理和药动学参数的估算
测得的受试者血浆中左旋多巴浓度-时间数据使用DAS2.0统计软件处理，分别用口服一室、二室开放模型进行房室模拟，房室模型以赤池信息（AIC）判断[4]。求得t1/2a、t1/2?、AUC0-∞、Cl、Vd等参数；并给出各参数的均值（X±SEM）
8结果
表1 2 名受试者口服 250mg、500mg左旋多巴
甲酯胶囊后左旋多巴的血浆浓度-时间数据
受试 时间（h）
0 0.167 0.333 0.5 0.75 1 1.5 2 2.5 3 5 8
X 0 617.9 2531.1 947.1 536.9 486.6 623.8 451.7 267.3 195.9 61.9 18.5
Y 0 66.6 1032.5 918.5 603.1 462.2 444.6 308.4 149.7 105.5 39.4 8
表2 2 名受试者口服 250mg、500mg左旋多巴
甲酯胶囊后尿中左旋多巴的累积排泄量
受
试 取尿样的时间（h）
0-1 1-3 3-5 5-12 12-24
X 2018840 1534596 74052 95095 21950
Y 143724 696512 28672 45888 35870
注：表1和2中X、Y为两男性健康受试者，分别服用0.5和0.25g左旋多巴甲酯胶囊
9药代动力学参数计算结果
表3 房室模型法估算口服左旋多巴甲酯胶囊后左旋多巴药代动力学参数
房室模型 参数值
房室参数 单位 剂量
250mg 500mg
AUC（0-t） mg/L*h 1346.085 1771.371
AUC（0-∞） mg/L*h 1366.582 1852.098
V1/F L 0.187 0.62
CL/F L/h 0.183 0.27
t1/2α h 0.559 0.335
t1/2β h 1.409 1.404
K10 1/h 0.977 0.436
K12 1/h 0.041 0.058
K21 1/h 0.714 2.066
Ka 1/h 23.993 5.948
t1/2Ka h 0.029 0.117
Tlag h 0.164 0
10小结
两受试者口服左旋多巴甲酯胶囊后约20分钟达峰浓度，口服250mg的受试者峰浓度为1032ng/ml，口服500mg的受试者峰浓度约为2531ng/ml。两名受试者在服药1.5小时后再次出现峰浓度，药物出现两个峰浓度可能与药物在体内先有部分左旋多巴甲酯水解为左旋多巴释放出来，一段时间后另一部分左旋多巴甲酯水解有关，这会延缓左旋多巴甲酯的药效，稳定的左旋多巴甲酯浓度避免了药物峰浓度过高引起的胃肠道和心血管系统的不良反应。左旋多巴甲酯具有较高的脂溶性，在体内迅速水解为左旋多巴，起效快，左旋多巴甲酯克服了左旋多巴的缺点，具有易溶于水、易进入血脑屏障，易制成各种口服剂型和注射剂，吸收快，疗效明显优于左旋多巴，左旋多巴甲酯提供了一种潜在的更可靠的治疗帕金森病患者运动波动的方法。
参考文献：
[1] 杨惠娣，费艳秋，王平全.HPLC法测定左旋多巴控释片血药浓度及其药代动力学研究[J].中国药房，2001；12（9）：543
[2] 迟 强，梅兴国.左旋多巴分析方法研究概况[J]. 国际药学研究杂志，2007；34（5）：369 -373
[3] 王莹，杭太俊，庄莹. 盐酸左旋多巴甲酯对映体的HPCE手性拆分[J]. 中国药科大学学报，2006；37（1）：88–90
[4] 袁静，王平全.高效液相色谱法测定左旋多巴-苄丝肼分散片血药浓度及其药代动力学研究[J]. 中国新药杂志，2001；10（2）：110-112
关键词：左旋多巴甲酯；高效液相色谱法；药代动力学
1 试验目的
采用低、高二种单剂量和多剂量的试验设计，对左旋多巴甲酯胶囊进行人体药代动力学研究，估算相应的药代动力学参数，为II期临床试验的剂量提供药代动力学参数依据。
2 血浆中药物的HPLC-荧光法测定方法[1]
色譜条件 流动相：甲醇 – 水相（13：87，v/v），其中水相含EDTA0.08mmol/L，KH2PO4 50mmol/L，庚烷磺酸钠2mmol/L，流速：1.0ml?min-1。色谱柱：Thermo C18（4.6mm×250mm，5m），激发波长为278nm，发射波长为325nm。
3 血浆样品的处理
精密吸取血浆样品300μl于塑料离心管中，加入20%高氯酸150?l，涡旋混匀，15000 rpm低温离心8 min，取上清液20?l进样分析。
4尿样中药物的HPLC-荧光法测定方法[2]
色谱条件 流动相：乙腈 – 水相（2.2：97.8，v/v），其中水相含EDTA0.08mmol/L，KH2PO450mmol/L，庚烷磺酸钠2mmol/L，流速：1.0ml?min-1，色谱柱Alltima C18（4.6mm×250mm，5m），激发波长为278nm，发射波长为325nm。
5尿样的处理
精密吸取尿样300μl于塑料离心管中，加入20%高氯酸100?l，涡旋混匀，15000 rpm低温离心8 min，取上清液20?l进样分析。
6根据《化学药物制人体药代动力学试验指导原则》的要求，给药剂量一般应与临床用药剂量基本一致[3]，故试验中药物临床给药途径为口服，单次给药剂量分低、高两个剂量组，分别为250mg、500mg。
7数据处理和药动学参数的估算
测得的受试者血浆中左旋多巴浓度-时间数据使用DAS2.0统计软件处理，分别用口服一室、二室开放模型进行房室模拟，房室模型以赤池信息（AIC）判断[4]。求得t1/2a、t1/2?、AUC0-∞、Cl、Vd等参数；并给出各参数的均值（X±SEM）
8结果
表1 2 名受试者口服 250mg、500mg左旋多巴
甲酯胶囊后左旋多巴的血浆浓度-时间数据
受试 时间（h）
0 0.167 0.333 0.5 0.75 1 1.5 2 2.5 3 5 8
X 0 617.9 2531.1 947.1 536.9 486.6 623.8 451.7 267.3 195.9 61.9 18.5
Y 0 66.6 1032.5 918.5 603.1 462.2 444.6 308.4 149.7 105.5 39.4 8
表2 2 名受试者口服 250mg、500mg左旋多巴
甲酯胶囊后尿中左旋多巴的累积排泄量
受
试 取尿样的时间（h）
0-1 1-3 3-5 5-12 12-24
X 2018840 1534596 74052 95095 21950
Y 143724 696512 28672 45888 35870
注：表1和2中X、Y为两男性健康受试者，分别服用0.5和0.25g左旋多巴甲酯胶囊
9药代动力学参数计算结果
表3 房室模型法估算口服左旋多巴甲酯胶囊后左旋多巴药代动力学参数
房室模型 参数值
房室参数 单位 剂量
250mg 500mg
AUC（0-t） mg/L*h 1346.085 1771.371
AUC（0-∞） mg/L*h 1366.582 1852.098
V1/F L 0.187 0.62
CL/F L/h 0.183 0.27
t1/2α h 0.559 0.335
t1/2β h 1.409 1.404
K10 1/h 0.977 0.436
K12 1/h 0.041 0.058
K21 1/h 0.714 2.066
Ka 1/h 23.993 5.948
t1/2Ka h 0.029 0.117
Tlag h 0.164 0
10小结
两受试者口服左旋多巴甲酯胶囊后约20分钟达峰浓度，口服250mg的受试者峰浓度为1032ng/ml，口服500mg的受试者峰浓度约为2531ng/ml。两名受试者在服药1.5小时后再次出现峰浓度，药物出现两个峰浓度可能与药物在体内先有部分左旋多巴甲酯水解为左旋多巴释放出来，一段时间后另一部分左旋多巴甲酯水解有关，这会延缓左旋多巴甲酯的药效，稳定的左旋多巴甲酯浓度避免了药物峰浓度过高引起的胃肠道和心血管系统的不良反应。左旋多巴甲酯具有较高的脂溶性，在体内迅速水解为左旋多巴，起效快，左旋多巴甲酯克服了左旋多巴的缺点，具有易溶于水、易进入血脑屏障，易制成各种口服剂型和注射剂，吸收快，疗效明显优于左旋多巴，左旋多巴甲酯提供了一种潜在的更可靠的治疗帕金森病患者运动波动的方法。
参考文献：
[1] 杨惠娣，费艳秋，王平全.HPLC法测定左旋多巴控释片血药浓度及其药代动力学研究[J].中国药房，2001；12（9）：543
[2] 迟 强，梅兴国.左旋多巴分析方法研究概况[J]. 国际药学研究杂志，2007；34（5）：369 -373
[3] 王莹，杭太俊，庄莹. 盐酸左旋多巴甲酯对映体的HPCE手性拆分[J]. 中国药科大学学报，2006；37（1）：88–90
[4] 袁静，王平全.高效液相色谱法测定左旋多巴-苄丝肼分散片血药浓度及其药代动力学研究[J]. 中国新药杂志，2001；10（2）：110-112