【摘 要】
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为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真Pfu DNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliella bardawil中提取基因组DNA作
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为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真Pfu DNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliella bardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用Taq DNA聚合酶及Pfu DNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272 bp长的三条带,而TD-PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的Pfu DNA聚合酶作PCR,在TD-PCR泳道中仅有1272bp一条带,而普通PCR除了1272bp的特异带外,还出现一条500bp的非特异带.无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu,改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性,类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.
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