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目的 建立稳定有效的小鼠视网膜小胶质细胞的分离培养方法,并研究小鼠视网膜小胶质细胞培养中的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的使用方法. 方法 取1 d C57乳鼠视网膜,吹打至碎片后接种于DMEM/F12完全培养基中,待混合胶质细胞充分长出后并分层后,恒温振荡法分离上层细胞,所得细胞使用抗体iba-1及F4/80双标免疫荧光染色鉴定细胞种类.将所得细胞,按添加mM-CSF方式进行分组:A组:空白对照组;B组:加入50 ng/ml mM-CSF且换液后补充;C组:加入100 ng/ml mM-CSF且换液后补充;D组:加入50 ng/ml mM-CSF且换液后不补充.在相差显微镜下观察各分组小胶质细胞培养情况;用MTT法检测10、50、100 ng/ml不同浓度mM-CSF对小胶质细胞培养增殖效果. 结果 所得细胞经iba-1及F4/80双标免疫荧光双染证实为小胶质细胞.培养10 d后,A组细胞逐渐减少;B组及C组细胞增殖明显,但形态变为长梭形;D组细胞增殖,并呈典型小胶质细胞分枝状.MTT实验结果显示100 ng/ml浓度mM-CSF刺激下细胞增殖最强,50 ng/ml浓度mM-CSF次之,而10 ng/ml浓度mM-CSF刺激细胞增殖能力最弱. 结论 本研究发现恒温振荡混合视网膜胶质细胞可以分离小鼠视网膜小胶质细胞,单次使用50 ng/ml浓度mM-CSF可以有效促进小鼠视网膜小胶质细胞存活并增殖。