小麦抗叶锈病Lr35基因同源序列RGA1侧翼序列的扩增与分析

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利用小麦抗叶锈病近等基因系材料TcLr35,根据已扩增出的Lr35相关基因组DNA片段RGAl设计3对特异性引物,通过热不对称交错PCR技术获得2个有效扩增片段,将目的片段回收纯化,连接到pGEM-T Easy载体,转化Ecoli DH5α感受态细胞中,经EcoR Ⅰ酶切,验证插入片段,选择合适菌液测序。获得了2条侧翼序列,长度分别为511bp和614bp,与RGA1重叠区分别为293bp和509bp,分别向3’端和5’端延长了208bp和100bp,拼接后序列为915bp。经BLASTn同源性比较与小麦
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