论文部分内容阅读
摘要[目的]研究冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉的抗焦虑作用。[方法]取健康雄性SD大鼠70只，按体重随机分为7组，模型对照组，冬虫夏草低剂量组
关键词冬虫夏草水提取物；速溶芦笋粉；抗焦虑；小鼠
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）14-04224-02
Study on Anxiolytic Activity of Water Extract from Cordyceps sinensis and the Instant Asparagus Powder in Rats
TANG Jianya，SUN Jin et al（State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122； School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122）
Abstract[Objective] To study anxiolytic activity of water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder.[Method] 70 healthy SpragueDawley male rats were randomly divided into 7 groups according to their weight for daily intragastric administration of drugs：model control group，water extract from Cordyceps sinensis lowdose （WECSl 8.4mg/kg），highdose （WECSh 16.8 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis lowdose with the instant asparagus powder （WECSl 8.4 mg/kg + IAP 400 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder （WECSh 16.8mg/kg+IAP 400mg/kg），the instant asparagus powder （IAP 400mg/kg） and normal control group.In this test，adopting the model of chronic emotional stress，the effect of antianxiety of the instant asparagus powder on the behavior and endocrine level was observed.[Result] The results of behavior showed the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder group （WECSh+IAP） attacks were significantly reduced，and WECSl+IAP group the exploration and preening behavior also significantly reduced，but the other groups has no significant differences while compared with the model control group （P>0.05）.The results of endocrine level showed that on the anxiety model，the WECSh+IAP group obviously decreased the concentrations of cortisol，epinephrine and noradrenaline in rats’ serum （P<0.05），the concentrations of 5HT and dopamine in rats’ serum was obviously increased at the same time （P<0.05）.[Conclusion] The combined use of the water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder has obvious antianxiety activity.
Key wordsWater extract from Cordyceps sinensis； Instant asparagus powder； Antianxiety； Rats
冬蟲夏草（CORDYCEPS）是麦角菌科真菌冬虫夏草菌[Cordyceps sinensis（Berk） Sacc]寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的干燥复合体。目前国内研究表明，冬虫夏草具有提高免疫力[1-2]、抗肿瘤[3]、镇静[4-5]等活性功能。芦笋（asparagus officinalis L.） 又名石刁柏、龙须菜，具有很高的营养保健价值，是一种食药兼用的名贵蔬菜[6]。研究表明，芦笋具有提高免疫力[7]、抗衰老[8]、改善睡眠[9-10]等活性功能。笔者探讨冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉以及二者的混合物抗焦虑活性，以期为速溶芦笋粉复合功能食品的开发提供科学的理论依据。 1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。冬虫夏草，购自无锡山禾健康李同丰参药店，经鉴定为CORDYCEPS。
1.1.2试验动物。选用SPF级雄性SD大鼠，体重200±20 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK（沪）20130016，使用许可证普通环境许可证号：SYXK（苏）20120001。
1.1.3主要试剂。速溶芦笋粉（ IAP），购自秦皇岛长胜农业科技发展有限公司；5羟色氨酸（5HT）、多巴胺（DA）、皮质醇（CORT）、肾上腺素（E）和去甲肾上腺素（NA）检测试剂盒，均购自上海联硕生物科技有限公司。
1.2方法
1.2.1试验设计。保持温度为20～25 ℃，相对湿度为40%～70%。试验共分7组：a正常对照组（Control），灌胃生理盐水；b模型对照组（Model），灌胃生理盐水c冬虫夏草水提取物低剂量组（WECSl），灌胃冬虫夏草水提取物8.4 mg/kg；d冬虫夏草水提取物高剂量组（WECSh），灌胃冬虫夏草水提取物16.8 mg/kg；e冬虫夏草水提取物低剂量+速溶芦笋粉（WECSl+IAP），灌胃冬虫夏草水提取物8.4 mg/kg+速溶芦笋粉400 mg/kg；f冬虫夏草水提取物高剂量+速溶芦笋粉（WECSh+IAP），灌胃冬虫夏草水提取物16.8 mg/kg+速溶芦笋粉400 mg/kg；g速溶芦笋粉（IAP），灌胃速溶芦笋粉400 mg/kg；每组10只，每日灌胃1次，每次4 ml。
1.2.2冬虫夏草水提取物（WECS）。取冬虫夏草子实体经高速组织捣碎机处理后，放于蒸馏水中低温浸提3次，每次24 h。每次浸提结束后，离心处理（3 000 r/min，4 ℃，10 min），再重新浸取。最后合并3次浸取上清，干燥，制得冬虫夏草水提取物；速溶芦笋粉为白色粉末，该样品是以芦笋副产物为原料，经过水浸提、脱色、脱重金属、过滤、浓缩和干燥工艺制备得到，即芦笋水提取物。
1.2.3慢性情绪应激模型。按照Nicolas V、王延丽等建立的模型研究慢性情绪应激[11-12]，并进行适当修改。大鼠经1周适应期后随机分组，除正常组外，模型组单笼饲养且接受不确定性空瓶饮水刺激建立焦虑应激模型。具体方法如下：定时喂水训练7 d，即每天早9：00～9：10和晚17：00～17：10给动物饮水10 min，其余时间撤去水瓶不给水。定时喂水期结束后开始应激试验，在上述2個时间段内给予不确定空瓶刺激，维持每天2次，持续2周。正常组不接受任何处理，自由饮水和摄食。行为学观察包括攻击（咬或攻击空瓶和笼子）、探究（前后左右运动和光顾水瓶所在位置）及修饰行为（梳理皮毛和洗脸）。具体方法是：将空瓶应激的10 min等分10个时间段，在每个时间段内记录每只大鼠上述3种行为，行为出现即为1，否则为0。10 min内观察的总分为0～10。得分基于2名观察者的观察结果平均而得，其中一人为双盲控制。14个观察日的前3 d和最后3 d的平均分用于统计分析。试验结束时采集标本，检测神经内分泌指标。
1.2.4试验指标的测定。行为学试验结束后立即断头取血， 置于离心管内，在4 ℃温度下3 000 r/min离心15 min，取上清液-20 ℃保存待测。以ELISA 法按照试剂盒的操作步骤分别进行检测血清中皮质酮、5羟色氨酸、多巴胺、皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素含量的测定。
1.2.5数据处理。采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析和多重比较，显著水平为P<0.05。
2结果与分析
2.1冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉对慢性情绪应激模型小鼠行为学的影响由表1可知，冬虫夏草水提取物和速溶芦笋粉在给药剂量下可以减少焦虑动物的攻击、探究和修饰行为的动作次数。其中，WECSh+IAP剂量组的攻击行为显著低于模型对照组（P<0.05），WECSl+IAP剂量组的探究行为和修饰行为显著低于模型对照组（P<0.05），其他各个处理组与模型对照组比较统计结果均没有显著差异（P>0.05）。
2.2冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉对小鼠血浆中内分泌水平的影响由表2可知，WECSh+IAP与WECSh在给药剂量下可以改变焦虑动物的血清中主要神经递质的含量，与模型对照组比较，显著降低血清皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素浓度，显著升高血清中5羟色氨酸和多巴胺的浓度 （P<0.05），且WECSh+IAP的抗焦虑效果优于WECSh。WECSl+IAP与模型对照组比较，显著降低血清中皮质醇、去甲肾上腺素的含量，显著升高血清中5羟色氨酸和多巴胺的含量（P<0.05）。WECSl与模型对照组比较，显著降低血清中皮质醇含量（P<0.05），显著提高血清中5羟色氨酸含量（P<0.05），其他检测指标的统计结果均没有显著差异（P>0.05）。IAP与模型对照组比较，显著升高血清中多巴胺和5羟色氨酸的含量（P<0.05），其他检测指标的统计结果均没有显著差异（P>0.05）。结果表明，冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉的联用能显著提高抗焦虑作用。
3结论
试验中空白对照组的5-HT含量明显高于模型对照组，而其他各个处理组的的5HT含量均高于模型对照组，表明5HT缺乏导致了焦虑。冬虫夏草水提取物高剂量与速溶芦笋粉（WECSh+IAP）处理组的攻击行为显著低于模型对照组（P<0.05），能减少小鼠自主活动次数，对陌生环境下中枢神经系统过度活动有一定抑制作用，显著降低应急状态下血清皮质醇浓度（压力状态的重要生化指标）（P<0.05），并能显著升高血清中5羟色胺酸和多巴胺水平（P<0.05）。WECSh也具有显著的抗焦虑作用，但是冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉的混合物（WECSh+IAP）抗焦虑作用均高于WECSh、IAP处理组，表明冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉联用可增强抗焦虑作用。 参考文献
[1] 顾国胜，任建安，李宁，等.冬虫夏草对大鼠肠黏膜屏障免疫功能影响的研究[J].肠外与肠内营养，2008，15（6）：326-328.
[2] 袁建国，程显好，侯永勤.冬虫夏草多糖组分研究及药理实验[J].食品与药品，2005，7（1）：45-48.
[3] 章力建，张红城，董捷，等.冬虫夏草辅助蜂胶抗肿瘤及其体外免疫作用研究初报[J].中国蜂业，2010，61（5）：7-10.
[4] 卢玉兰，翁开敏.冬虫夏草的药理作用研究[J].中国药师，2003，6（6）：371-372.
[5] 石岩，魏锋，马双成，等.冬虫夏草及其菌丝体药理作用研究概况[J].中国药事，2013，27（8）：847-849.
[6] 胡立勇，余德谦.芦笋栽培与加工[M].北京：科学技术文献出版社，1998：1-10.
[7] 张志远.芦笋粗多糖对正常小鼠免疫功能的影響[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2003，23（2）：83-84.
[8] 苗明三，顾丽亚，方哓燕，等.芦笋多糖对衰老模型小鼠的影响[J].中国中药杂志，2004，29（7）：673- 675.
[9] 马淑凤，王芳，李汉臣，等.速溶芦笋粉改善睡眠功能的研究[J].食品工业科技，2012，33（18）：359-362.
[10] 马淑凤，王芳，李汉臣，等.不同皂苷质量分数速溶芦笋粉改善睡眠作用[J].食品与生物技术学报，2013，32（8）：793-798.
[11] NICOLAS V，MICHAL M，CATHERINE L M.Ethological comparison of the effects of a bovine αs1casein tryptic hydrolysate and diazepam on the behaviour of rats in two models of anxiety[J].Pha，Biochemistry and Behavior，2006，84：517-523.
[12] 王延丽，刘勇，石晋丽.缬草素抗焦虑作用及其机制的初探[J].中国药理学通报，2011，27（4）：501-504.
关键词冬虫夏草水提取物；速溶芦笋粉；抗焦虑；小鼠
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）14-04224-02
Study on Anxiolytic Activity of Water Extract from Cordyceps sinensis and the Instant Asparagus Powder in Rats
TANG Jianya，SUN Jin et al（State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122； School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi，Jiangsu 214122）
Abstract[Objective] To study anxiolytic activity of water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder.[Method] 70 healthy SpragueDawley male rats were randomly divided into 7 groups according to their weight for daily intragastric administration of drugs：model control group，water extract from Cordyceps sinensis lowdose （WECSl 8.4mg/kg），highdose （WECSh 16.8 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis lowdose with the instant asparagus powder （WECSl 8.4 mg/kg + IAP 400 mg/kg），the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder （WECSh 16.8mg/kg+IAP 400mg/kg），the instant asparagus powder （IAP 400mg/kg） and normal control group.In this test，adopting the model of chronic emotional stress，the effect of antianxiety of the instant asparagus powder on the behavior and endocrine level was observed.[Result] The results of behavior showed the water extract from Cordyceps sinensis highdose with the instant asparagus powder group （WECSh+IAP） attacks were significantly reduced，and WECSl+IAP group the exploration and preening behavior also significantly reduced，but the other groups has no significant differences while compared with the model control group （P>0.05）.The results of endocrine level showed that on the anxiety model，the WECSh+IAP group obviously decreased the concentrations of cortisol，epinephrine and noradrenaline in rats’ serum （P<0.05），the concentrations of 5HT and dopamine in rats’ serum was obviously increased at the same time （P<0.05）.[Conclusion] The combined use of the water extract from Cordyceps sinensis and the instant asparagus powder has obvious antianxiety activity.
Key wordsWater extract from Cordyceps sinensis； Instant asparagus powder； Antianxiety； Rats
冬蟲夏草（CORDYCEPS）是麦角菌科真菌冬虫夏草菌[Cordyceps sinensis（Berk） Sacc]寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的干燥复合体。目前国内研究表明，冬虫夏草具有提高免疫力[1-2]、抗肿瘤[3]、镇静[4-5]等活性功能。芦笋（asparagus officinalis L.） 又名石刁柏、龙须菜，具有很高的营养保健价值，是一种食药兼用的名贵蔬菜[6]。研究表明，芦笋具有提高免疫力[7]、抗衰老[8]、改善睡眠[9-10]等活性功能。笔者探讨冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉以及二者的混合物抗焦虑活性，以期为速溶芦笋粉复合功能食品的开发提供科学的理论依据。 1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象。冬虫夏草，购自无锡山禾健康李同丰参药店，经鉴定为CORDYCEPS。
1.1.2试验动物。选用SPF级雄性SD大鼠，体重200±20 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK（沪）20130016，使用许可证普通环境许可证号：SYXK（苏）20120001。
1.1.3主要试剂。速溶芦笋粉（ IAP），购自秦皇岛长胜农业科技发展有限公司；5羟色氨酸（5HT）、多巴胺（DA）、皮质醇（CORT）、肾上腺素（E）和去甲肾上腺素（NA）检测试剂盒，均购自上海联硕生物科技有限公司。
1.2方法
1.2.1试验设计。保持温度为20～25 ℃，相对湿度为40%～70%。试验共分7组：a正常对照组（Control），灌胃生理盐水；b模型对照组（Model），灌胃生理盐水c冬虫夏草水提取物低剂量组（WECSl），灌胃冬虫夏草水提取物8.4 mg/kg；d冬虫夏草水提取物高剂量组（WECSh），灌胃冬虫夏草水提取物16.8 mg/kg；e冬虫夏草水提取物低剂量+速溶芦笋粉（WECSl+IAP），灌胃冬虫夏草水提取物8.4 mg/kg+速溶芦笋粉400 mg/kg；f冬虫夏草水提取物高剂量+速溶芦笋粉（WECSh+IAP），灌胃冬虫夏草水提取物16.8 mg/kg+速溶芦笋粉400 mg/kg；g速溶芦笋粉（IAP），灌胃速溶芦笋粉400 mg/kg；每组10只，每日灌胃1次，每次4 ml。
1.2.2冬虫夏草水提取物（WECS）。取冬虫夏草子实体经高速组织捣碎机处理后，放于蒸馏水中低温浸提3次，每次24 h。每次浸提结束后，离心处理（3 000 r/min，4 ℃，10 min），再重新浸取。最后合并3次浸取上清，干燥，制得冬虫夏草水提取物；速溶芦笋粉为白色粉末，该样品是以芦笋副产物为原料，经过水浸提、脱色、脱重金属、过滤、浓缩和干燥工艺制备得到，即芦笋水提取物。
1.2.3慢性情绪应激模型。按照Nicolas V、王延丽等建立的模型研究慢性情绪应激[11-12]，并进行适当修改。大鼠经1周适应期后随机分组，除正常组外，模型组单笼饲养且接受不确定性空瓶饮水刺激建立焦虑应激模型。具体方法如下：定时喂水训练7 d，即每天早9：00～9：10和晚17：00～17：10给动物饮水10 min，其余时间撤去水瓶不给水。定时喂水期结束后开始应激试验，在上述2個时间段内给予不确定空瓶刺激，维持每天2次，持续2周。正常组不接受任何处理，自由饮水和摄食。行为学观察包括攻击（咬或攻击空瓶和笼子）、探究（前后左右运动和光顾水瓶所在位置）及修饰行为（梳理皮毛和洗脸）。具体方法是：将空瓶应激的10 min等分10个时间段，在每个时间段内记录每只大鼠上述3种行为，行为出现即为1，否则为0。10 min内观察的总分为0～10。得分基于2名观察者的观察结果平均而得，其中一人为双盲控制。14个观察日的前3 d和最后3 d的平均分用于统计分析。试验结束时采集标本，检测神经内分泌指标。
1.2.4试验指标的测定。行为学试验结束后立即断头取血， 置于离心管内，在4 ℃温度下3 000 r/min离心15 min，取上清液-20 ℃保存待测。以ELISA 法按照试剂盒的操作步骤分别进行检测血清中皮质酮、5羟色氨酸、多巴胺、皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素含量的测定。
1.2.5数据处理。采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析和多重比较，显著水平为P<0.05。
2结果与分析
2.1冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉对慢性情绪应激模型小鼠行为学的影响由表1可知，冬虫夏草水提取物和速溶芦笋粉在给药剂量下可以减少焦虑动物的攻击、探究和修饰行为的动作次数。其中，WECSh+IAP剂量组的攻击行为显著低于模型对照组（P<0.05），WECSl+IAP剂量组的探究行为和修饰行为显著低于模型对照组（P<0.05），其他各个处理组与模型对照组比较统计结果均没有显著差异（P>0.05）。
2.2冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉对小鼠血浆中内分泌水平的影响由表2可知，WECSh+IAP与WECSh在给药剂量下可以改变焦虑动物的血清中主要神经递质的含量，与模型对照组比较，显著降低血清皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素浓度，显著升高血清中5羟色氨酸和多巴胺的浓度 （P<0.05），且WECSh+IAP的抗焦虑效果优于WECSh。WECSl+IAP与模型对照组比较，显著降低血清中皮质醇、去甲肾上腺素的含量，显著升高血清中5羟色氨酸和多巴胺的含量（P<0.05）。WECSl与模型对照组比较，显著降低血清中皮质醇含量（P<0.05），显著提高血清中5羟色氨酸含量（P<0.05），其他检测指标的统计结果均没有显著差异（P>0.05）。IAP与模型对照组比较，显著升高血清中多巴胺和5羟色氨酸的含量（P<0.05），其他检测指标的统计结果均没有显著差异（P>0.05）。结果表明，冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉的联用能显著提高抗焦虑作用。
3结论
试验中空白对照组的5-HT含量明显高于模型对照组，而其他各个处理组的的5HT含量均高于模型对照组，表明5HT缺乏导致了焦虑。冬虫夏草水提取物高剂量与速溶芦笋粉（WECSh+IAP）处理组的攻击行为显著低于模型对照组（P<0.05），能减少小鼠自主活动次数，对陌生环境下中枢神经系统过度活动有一定抑制作用，显著降低应急状态下血清皮质醇浓度（压力状态的重要生化指标）（P<0.05），并能显著升高血清中5羟色胺酸和多巴胺水平（P<0.05）。WECSh也具有显著的抗焦虑作用，但是冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉的混合物（WECSh+IAP）抗焦虑作用均高于WECSh、IAP处理组，表明冬虫夏草水提取物与速溶芦笋粉联用可增强抗焦虑作用。 参考文献
[1] 顾国胜，任建安，李宁，等.冬虫夏草对大鼠肠黏膜屏障免疫功能影响的研究[J].肠外与肠内营养，2008，15（6）：326-328.
[2] 袁建国，程显好，侯永勤.冬虫夏草多糖组分研究及药理实验[J].食品与药品，2005，7（1）：45-48.
[3] 章力建，张红城，董捷，等.冬虫夏草辅助蜂胶抗肿瘤及其体外免疫作用研究初报[J].中国蜂业，2010，61（5）：7-10.
[4] 卢玉兰，翁开敏.冬虫夏草的药理作用研究[J].中国药师，2003，6（6）：371-372.
[5] 石岩，魏锋，马双成，等.冬虫夏草及其菌丝体药理作用研究概况[J].中国药事，2013，27（8）：847-849.
[6] 胡立勇，余德谦.芦笋栽培与加工[M].北京：科学技术文献出版社，1998：1-10.
[7] 张志远.芦笋粗多糖对正常小鼠免疫功能的影響[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2003，23（2）：83-84.
[8] 苗明三，顾丽亚，方哓燕，等.芦笋多糖对衰老模型小鼠的影响[J].中国中药杂志，2004，29（7）：673- 675.
[9] 马淑凤，王芳，李汉臣，等.速溶芦笋粉改善睡眠功能的研究[J].食品工业科技，2012，33（18）：359-362.
[10] 马淑凤，王芳，李汉臣，等.不同皂苷质量分数速溶芦笋粉改善睡眠作用[J].食品与生物技术学报，2013，32（8）：793-798.
[11] NICOLAS V，MICHAL M，CATHERINE L M.Ethological comparison of the effects of a bovine αs1casein tryptic hydrolysate and diazepam on the behaviour of rats in two models of anxiety[J].Pha，Biochemistry and Behavior，2006，84：517-523.
[12] 王延丽，刘勇，石晋丽.缬草素抗焦虑作用及其机制的初探[J].中国药理学通报，2011，27（4）：501-504.